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第一部分人胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901侧群细胞检测及分选【目的】检测胃癌细胞株中的SP细胞比例,并分选出SP细胞。【方法】选择低、中分化程度的人胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901,应用流式细胞仪荧光激活分选法,以Hoechst33342染色,维拉帕米拮抗对照,检测2株人胃癌细胞株中的SP细胞比例,并分选出SP细胞。【结果】BGC-823SP细胞比例为2.60%±1.25%,SGC-7901SP细胞比例为2.53%±0.85%。【结论】人胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901中存在一定数量的SP细胞,且可被分选,不同分化程度的肿瘤细胞SP细胞的比例存在一定的差异。第二部分人胃癌细胞BGC-823、SGC-7901侧群细胞的生物学鉴定【目的】从体外增殖活力、侵袭能力、成瘤能力等方面对分选出的人胃癌SP细胞进行生物学特征的初步鉴定,探讨以SP细胞作为肿瘤干细胞研究切入点的可行性。【方法】通过细胞生长曲线(CCK-8法)、平板克隆形成实验比较SP细胞与NSP细胞及未分选细胞的体外增殖活力;应用细胞侵袭transwell试验比较胃癌SP与NSP及未分选细胞的侵袭能力差异;应用异种移植NOD/SCID小鼠成瘤实验比较胃癌SP与NSP细胞及未分选细胞的体内成瘤能力差异;通过胃癌SP体内成瘤细胞分化现象鉴定其多向分化特性。【结果】细胞生长曲线显示,BGC-823及SGC-7901SP细胞的增殖能力明显高于NSP细胞及未分选细胞(P<0.05)。平板克隆实验结果显示,BGC-823及SGC-7901SP细胞克隆形成率大于大于NSP及未分选细胞(P<0.05)。Transwell细胞侵袭实验显示,BGC-823及SGC-7901SP细胞侵袭力小于NSP细胞及未分选细胞(P<0.05)。异种移植瘤实验结果显示,BGC-823及SGC-7901SP细胞在最早成瘤时间、瘤体生长曲线及最终成瘤重量上均显示出较NSP细胞及未分选细胞强的成瘤能力。胃癌SP细胞与NSP细胞及未分选细胞成瘤后,均可转化成不同分化程度的胃癌细胞。【结论】人胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901的SP细胞具有较NSP细胞及未分选细胞强的体外增殖活力、成瘤能力,侵袭力较弱,具有多向分化特性,符合肿瘤干细胞特性,SP细胞富集肿瘤干细胞,可以作为肿瘤干细胞研究的切入点。第三部分四君子汤药物血清对人胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901侧群细胞生物学特性的影响【目的】从体外增殖活力、成瘤能力研究四君子汤药物血清干预后对人胃癌SP细胞生物学特性的影响,为中药四君子汤在胃癌的治疗及相关应用提供客观的实验及理论依据。【方法】制作动物药物血清,高效液相色谱分析法检测血清药效浓度,药物血清干预胃癌SP细胞后通过细胞生长曲线(CCK-8法)、平板克隆形成实验比较对体外增殖活力的影响,应用异种移植NOD/SCID小鼠成瘤实验比较对体内成瘤能力的影响。【结果】高效液相色谱分析法显示药物血清存在人参皂甙Rg1的药效成分,细胞生长曲线显示,经药物血清干预后BGC-823、SGC-7901的SP及NSP组细胞增殖活力低于未经干预组细胞(P<0.05),异种移植瘤实验结果显示,经药物血清干预后BGC-823、SGC-7901的SP及NSP组细胞在瘤体生长曲线及最终成瘤重量上显示出较未经干预细胞组弱的成瘤能力(P<0.05)。【结论】四君子汤药物血清干预后,胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901SP及NSP细胞的体外增殖能力,成瘤能力均下降,四君子汤药物血清对胃癌株BGC-823、SGC-7901SP细胞的体外增殖、成瘤有抑制作用。