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FGF21是近年来发现的成纤维细胞生长因子FGF19亚家族中一种内分泌代谢调节因子,具有促进脂肪细胞摄取葡萄糖,促进胰岛素分泌,延缓肿瘤的发展等功能。近年来的研究发现,FGF21是成纤维细胞生长因子FGF19亚家族中最有潜力成为糖尿病治疗药物的一种内分泌代谢调节因子,其最大的优点在于不仅可以起降糖作用,而且不会引起其他糖尿病药物共有的低血糖或水肿效应。本课题拟将人成纤维细胞生长因子-21(hFGF21)进行可溶性表达,获得纯度较高的具有生物学活性的hFGF21。
方法：
采用全基因合成的方法,获得带有偏好密码子的hFGF21基因片段。将该片断插入表达载体中,构建了重组表达菌株BL21 Star(DE3)plysS/pET-3c-hFGF21。利用IPTG诱导表达,通过Q Sepharose Fast Flow阴离子交换柱和Welch C18反相柱层析法分离纯化hFGF21,并用SDS-PAGE,HPLC,Western Blotting行了测定。GOD-POD法测定了hFGF21对分化的3T3-L1细胞的降糖活性。
结果：
成功构建了重组表达菌株BL21 Star(DE3)plysS/pET-3c-hFGF21,并优化了表达条件,经Q Sepharose Fast Flow阴离子交换柱和Welch C18反相柱纯化后获得了具有降糖活性的hFGF21。
结论：
本课题提出了获得可溶性的、具有生物活性的hFGF21的表达、纯化及活性检测工艺路线。