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目的:朊病毒病(prion disease)是一类罕见的致死性神经系统退行性疾病。其致病因子朊病毒是一种可以自我复制的蛋白,其毒性区域在第106-126位氨基酸,主要存在于脑神经细胞中;14-3-3β蛋白是哺乳动物体内普遍存在的一种蛋白,主要存在于脑神经细胞中,具有信号传导和保护功能。我们的研究目的就是希望通过正常的朊蛋白与14-3-3β蛋白之间是否发生相互作用以及确定作用的区域来了解14-3-3β蛋白在克雅氏病的发病过程中的可能机制。方法:我们首先将表达实验中使用的朊蛋白基因序列和14-3-3β蛋白基因序列进行构建并表达蛋白;再分别在体外和细胞水平,利用免疫共沉淀、pull down和能量共振转移(FRET)实验检测朊蛋白与人14-3-3β蛋白是否发生分子间的相互作用及相互作用的部位。结果:我们先将一组重组的朊蛋白(包含有朊蛋白的106-126位氨基酸)与重组的14-3-3β蛋白分别进行免疫共沉淀实验和pull down实验,;其次我们又分别用重组的朊蛋白与天然的14-3-3β蛋白和天然的朊蛋白与重组的14-3-3β蛋白分别进行pull down实验,;接着我们将天然的朊蛋白与天然的14-3-3β蛋白进行免疫共沉淀实验。但是为了确定两者相互作用的区域,我们接着将另一组重组朊蛋白(部分包含朊蛋白106-126位氨基酸)与重组的14-3-3β蛋白进行了免疫共沉淀实验。同时为了研究朊蛋白与14-3-3β蛋白在细胞水平是否相互作用,我们先将没有信号肽的朊蛋白(PrP23-231)转染HeLa细胞,使得朊蛋白在胞浆中表达,并分别使用两种蛋白抗体孵育,再分别加入FITC标记的抗鼠二抗和Rodamine标记的抗兔二抗孵育,进一步处理后镜下观察。结论:通过以上实验我们得到二条重要结论,其一是朊蛋白可以与14-3-3β蛋白在体外和细胞水平均可以发生相互作用,其二是朊蛋白与14-3-3β蛋白发生相互作用的区域在朊蛋白的106-126位氨基酸。而朊蛋白的毒性区域在氨基酸序列的第106-126位。因此14-3-3β蛋白是否通过朊蛋白的106-126位氨基酸发挥调节作用,是否能抑制朊病毒的复制和疾病的发展等朊病毒病的发病机理研究具有重要意义。