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目的:制备阳和汤含药血清,干预乳腺癌MCF-7细胞,进而观测MCF-7细胞的增殖情况。通过有丝分裂原激活蛋白激酶(p38)/信号传导与转录激活因子3(STAT3)信号通路,探索阳和汤治疗乳腺癌的作用机制,为后续研究奠定前期基础,为临床应用提供实验依据。方法:1.制备阳和汤药液:将按照阳和汤处方购买的药材熬制成1 g·m L-1的阳和汤药液。2.制备阳和汤含药血清:将20只雌性SPF级SD大鼠随机分为空白组(蒸馏水),阳和汤低、中、高剂量组(6 g·kg-1、12 g·kg-1、24 g·kg-1)。灌胃三天后腹主动脉取血,离心,制备含药血清。3.细胞培养:将MCF-7细胞复苏,加入含胎牛血清及双抗的DMEM培养基,放置于37℃,CO2培养箱中培养。4.细胞干预:取对数期生长的细胞,分为空白组,阳和汤低、中、高剂量组,分别加入相对应的含药血清进行干预。通过细胞增殖及细胞毒性实验(CCK-8),检测阳和汤含药血清对MCF-7细胞增殖的影响;通过细胞周期实验,检测阳和汤含药血清对MCF-7细胞周期的影响;通过DAPI染色,检测阳和汤含药血清对MCF-7细胞核形态的影响;通过流式细胞术(Annexin、V-FITC/PI双染法),检测阳和汤含药血清对MCF-7细胞凋亡的影响;通过蛋白免疫印迹法(Western blot),检测阳和汤含药血清对MCF-7细胞p38、生存素(Survivin)、B细胞淋巴瘤/白血病-x L(Bcl-x L)、磷酸化的信号传导与转录激活因子3(p-STAT3)和STAT3蛋白表达的影响;通过实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR),检测阳和汤含药血清对MCF-7细胞p38,STAT3,Survivin和Bcl-x L m RNA表达的影响。结果:CCK-8实验结果显示,与空白组对比,阳和汤含药血清抑制MCF-7细胞增殖,且与时间及剂量相关。其中高剂量组抑制作用最为明显,不同时间抑制率分别达到38%,45%,54%(P<0.05);细胞周期实验结果显示,与空白组对比,阳和汤含药血清明显改变MCF-7细胞周期,将细胞周期阻滞在S期;DAPI染色实验结果显示,与空白组对比,阳和汤含药血清能显著破坏MCF-7细胞核结构,且与剂量相关;流式细胞术(Annexin、V-FITC/PI双染法)实验表明,与空白组对比,阳和汤含药血清中剂量组与高剂量组能增加MCF-7细胞凋亡率,且与剂量相关,凋亡率分别达12.8%,23.1%(P<0.05);Western blot实验表明,与空白组对比,阳和汤含药血清能减少MCF-7细胞中p38,STAT3,Survivin,Bcl-x L和p-STAT3蛋白表达量(P<0.05),且与剂量相关;q RT-PCR实验表明,与空白组对比,阳和汤含药血清能减少MCF-7细胞中p38,STAT3,Survivin和Bcl-x L m RNA的表达量(P<0.05),且与剂量相关。结论:阳和汤含药血清能抑制MCF-7细胞增殖,通过改变细胞周期,破坏细胞核结构,抑制p38的表达,从而减少STAT3,Survivin,Bcl-x L和p-STAT3的表达量,促进细胞凋亡。阳和汤含药血清对MCF-7细胞增殖的影响可能与p38/STAT3信号通路有关。