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目的本文探讨替普瑞酮(Geranylgeranylacetone,GGA)对百草枯(paraquat,PQ)诱导的SH-SY5Y细胞氧化应激损伤模型的神经保护作用。进一步研究对该细胞模型TDP43(35kDa)蛋白水平与自噬的影响。方法1、为了观察GGA对百草枯诱导的SH-SY5Y细胞氧化应激损伤模型的保护作用(实验1),利用1mmol/L PQ诱导SH-SY5Y细胞建立氧化应激损伤模型,SHSY5Y细胞分为A组(对照组)、B组(100μmol/L GGA处理组)、C组(1mmol/L PQ处理组)、D-F组(PQ诱导的氧化应激损伤模型分别用浓度为20,50,100μmol/L GGA处理24小时)。利用MTT比色法及流式测凋亡法检测SH-SY5Y细胞各组的存活率和凋亡率。2、为观察GGA对TDP43(35kDa)蛋白水平变化(实验2),分组同实验1。利用Western blot检测TDP43(35kDa)蛋白的表达水平。3、为观察GGA在此模型中对自噬的影响(实验3),分组同实验1。利用Western blot检测自噬相关蛋白LC3B与P62蛋白的表达水平。4、为观察GGA对TDP43(35kDa)蛋白水平变化的影响是否通过激活自噬发挥作用(实验4),SH-SY5Y细胞分为A组(对照组)、B组(1mmol/L PQ处理组)C、D组(PQ诱导的氧化应激模型分别以100μmol/L GGA处理24小时,其中D组用5mmol/L的3-MA阻断自噬)利用Western blot检测TDP43(35kDa)和LC3B蛋白水平。5、为观察GGA对TFEB的影响(实验5),分组SH-SY5Y细胞分为A组(control对照组)、B组(100μmol/L GGA处理组)、C组(PQ诱导的氧化应激模型)、D组(100μmol/L GGA处理该模型)。利用细胞免疫化学法染色,激光共聚焦显微镜观察TFEB进入细胞核的情况。结果1、实验(1)MTT结果显示,1mmol/L PQ处理组细胞存活率与对照组细胞比较明显降低。随着GGA的治疗浓度的升高(20,50,100μmol/L)细胞存活率也随之升高(P<0.01)。1mmol/L PQ处理组细胞凋亡率与对照组比较显著增高,随着GGA的治疗浓度的升高细胞凋亡率逐渐降低(P<0.01)。100μmol/L GGA处理组的SHSY5Y细胞存活率、凋亡率与对照组无差异说明该浓度下的GGA对SH-SY5Y细胞无毒性。2、实验(2)Western blot结果显示,通过1mmol/L PQ处理后,TDP43(35kDa)蛋白与对照组相比蛋白水平明显增加,通过GGA处理后发现该模型内的TDP43(35kDa)蛋白水平降低且呈浓度依赖性(P<0.01)。3、实验(3)Western blot结果显示,用LC3Ⅱ/Ι蛋白比值与P62蛋白水平来体现自噬强度,GGA治疗后LC3Ⅱ/Ι蛋白比值升高且P62蛋白表达减少(P<0.01),GGA能够在PQ诱导的SH-SY5Y细胞中增强自噬。4、实验(4)Western blot结果显示,用3-MA抑制自噬以后GGA对PQ诱导的SH-SY5Y细胞内TDP43(35kDa)蛋白水平的清除能力减弱(P<0.01)。说明GGA在一定程度上是通过自噬的启动来清除TDP43(35kDa)蛋白。5、实验(5)细胞免疫化学染色结果显示,GGA对百草枯诱导的SH-SY5Y细胞内的TFEB具有促进入核的作用(P<0.05)。结论我们的研究表明GGA对PQ诱导的SH-SY5Y细胞氧化应激损伤具有神经保护作用。GGA通过增强自噬降低该细胞模型内TDP43(35kDa)蛋白水平。GGA的这种作用为其成为治疗肌萎缩侧索硬化的候选药物提供了参考。