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朱蕉(Cordyline terminals L.)别名铁树、红竹、千年木,为龙舌兰科(在恩格勒系统中被称为百合科)朱蕉属单子叶木本常绿灌木。朱蕉原产亚洲热带及太平洋各岛屿,株形美观,叶片斑纹,色彩华丽高雅,盆栽适用于室内装饰,是最常见的室内观叶植物。利用常规的扦插繁殖的方法效率很低,并因需要较多的枝条作为繁殖材料而严重影响母树植株。特别是对于新引进或新培育的优良品种,要在短期内进行大量繁殖以满足市场的需求,就只有采用组培快繁技术才可能实现。对朱蕉的离体培养调控技术进行研究,不仅可以提高植株再生的培养效率,还可以建立新的育种方法。。
本研究以朱蕉无菌苗的叶片、嫩茎或根作为外植体材料,开展了愈伤组织的诱导、细胞悬浮培养体系的建立以及原生质体游离的试验,得到如下主要结果。
1.朱蕉无菌苗的叶片相对于嫩茎和根更适合作为诱导愈伤组织的外植体材料。在MS无机成分+B5有机成分+0.5g/L水解乳蛋白+2.0mg/L Picloram+0.2mg/L BA+0.7%琼脂粉或MS无机成分+B5有机成分+0.5g/L水解乳蛋白+2.0mg/L Picloram+0.2mg/L KT+0.7%琼脂粉的培养基条件下可以诱导愈伤组织的形成;在愈伤组织诱导培养基中加入铜离子和硝酸银能显著改善愈伤组织状态。
2.朱蕉叶片形成的愈伤组织可以作为建立悬浮培养细胞系的出发材料。以MS无机成分+B5有机成分+0.5g/L水解乳蛋白+2.0mg/L Picloram+0.2mg/LBA的液体培养基,在开始时7天更换1次培养基,后来每3天继代一次,可以得到状态稳定的悬浮培养细胞系。
3.将由悬浮培养细胞系增殖得到的愈伤组织团块经过1、2、4、8、10天和失重率分别为13.83、22.56、44.86、77.32和84.56%的脱水处理,可以显著改善愈伤组织团块的状态和培养反应。
4.进行朱蕉叶片原生质体游离时最合适的酶液组成为:1.0%Macerozyme R-10+2%-3.0%Cellulase Onzuka R-10+13%甘露醇(pH值为5.8)。通过7-9小时的酶解处理,原生质体最高产量达到7.6×10<6>个/g鲜重,有活力的原生质体达到96.67%。
5.纯化原生质体时,采用1000rpm离心.5min,能够得到明显的原生质体条带;随后采用950rpm离心4min,其回收率和存活率分别达到91.25%和74.55%。