黄瓜和南瓜原生质体培养及融合研究

来源 :西南农业大学 西南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wenhao_andy
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该文以栽培黄瓜、半野生黄瓜、中国南瓜以及黑籽南瓜为材料,深入开展了原生质体分离、培养和融合研究,得出如下结果。黄瓜和南瓜分别以0.25-0.3M和0.3-0.4M甘露醇为酶液渗透稳定剂的适宜浓度范围。在含1﹪Cellulase Onzuka R-10、0.5﹪Macerozyme R-10和0.3﹪Hemicellulase或在含0.7﹪Cellulase Onozuka R-10、0.3﹪Macerozyme R-10和0.25﹪Hemicellulase以及其它成分的酶液中,26±1℃和黑暗条件下,60r/m分别振荡酶解5-6hr或14-16hr,由刚全展开的7天左右子叶或15天左右真叶均能分离出大量有活力的原生质体。黄瓜原生质体对NH<,4><’+>敏感。去掉NH<,4>NO<,3>的KM<,8P>基本培养基既适宜黄瓜,也适合中国南瓜和黑籽南瓜原生质体培养。适宜的培养密度为1-9×10<’5>个/ml。在含有0.5-1mg/L 2,4-D和1mg/L BA(或KT)的培养基中,黄瓜和中国南瓜子叶原生质体分裂率分别为20-28﹪和10﹪左右。附加1.0mg/L 2.4-D、0.5mg/L KT和1mg/L BA的培养基更适合黑籽南瓜子叶原生质体培养。所有供试材料均由原生质体再生大量愈伤组织。成都二早子黄瓜真叶来源的愈伤组织在B<,5>附加2mg/L BA、0.05mg/L NAA和3﹪蔗糖的固体培养基上诱导出体细胞胚状体。这些胚状体在1-2mg/L BA、0.0-0.1mg/L NAA和5﹪蔗糖的B<,5>固体培养基上有利于发育,在不含生长调节剂和低浓度蔗糖的MS固体培养基上有利于萌发。植株转化率为1﹪左右。此外,由成都二早子黄瓜子叶原生质体愈伤组织直接分化出不定芽。这些不定芽不仅可以发育成绿苗、生根(100﹪)成为健壮小植株,而且可以经含5mg/L NAA培养基培养后转移到低NAA培养基上再生幼小雄花。另外,由中国南瓜获得白化苗。黄瓜子叶原生质体经10ug/ml R6G处理15分钟,或经1.5mM IOA处理10分钟,以及南瓜和黑籽南瓜子叶原生质体分别经1.0mM或1.3mM IOA处理10分钟,均能使原生质体失去分裂能力。成都二早子黄瓜分别与津研四号、长春密刺、版纳黄瓜、中国南瓜和黑籽南瓜,津研四号黄瓜与版纳黄瓜,以及长春密刺黄瓜与黑籽南瓜等七个组合(前者经R6G,后者经IOA处理)的1-2×10<’6>/ml高密度混合原生质体,经25﹪或30﹪PEG(6000)处理5-10分钟,0.1MCa<’2+>pH9-9.5稀释液处理5分钟,均获得较好的融合效果。有部分原生质体恢复分裂能力,形成愈伤组织而且分化出根。部分愈伤组织通过同功酶分析确定为体细胞杂种。
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