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本论文参考已报导的戴尔根霉脂肪酶基因序列设计了一对特异性引物，为了便于定向克隆，在上下游引物两端分别引入了SnaBⅠ和NotⅠ酶切位点。用PCR方法从戴尔根霉(RhizopusdelemarAS3.230)中成功扩增出编码脂肪酶的成熟肽基因，将其连入克隆载体pUCm-T中，构建重组质粒pUCmT-LipRD，转化大肠杆菌(E.coli)DH5α，蓝白斑初步筛选转化子，提取质粒进行SnaBⅠ/NotⅠ双酶切鉴定及PCR鉴定，筛选阳性克隆。序列测定结果表明，该序列与戴尔根霉的脂肪酶序列(GenBankaccessionNo.M38352)一致。
重组质粒pUCmT-LipRD经测序正确后，经SnaBⅠ/NotⅠ双酶切与载体pPIC9K连接，构建表达载体pPIC9K-LipRD。采用电击转化法，将线形化的表达载体转入受体菌组氨酸(His4)缺陷型巴斯德毕赤酵母GS115中，通过G418抗性平板和三丁酸甘油酯平板活性筛选法共筛选获得7株高表达的重组转化子。重组子以AOX1为启动子，用甲醇诱导表达，表达产物经SDS-PAGE电泳分析，大小为35kD，摇瓶96h发酵液酶活可达到31U/ml。
考察了诱导时间、诱导剂浓度、诱导温度等条件对目标蛋白表达量的影响，结果表明，终浓度为0.9％的甲醇，诱导时间为96h，诱导温度为29℃时，表达产物的活性最大。