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目的：建立器官培养法供体角膜保存技术，观察和评价保存时间、保存角膜片的脱水对角膜内皮细胞的影响，及保存期内微生物学的安全性。 材料与方法：37只供体人角膜作为研究材料；20只为周边巩膜角膜片（中央部已供临床角膜移植使用），分成培养保存7天组、14天组、21天组和28天组；17只为完整的巩膜角膜片（包含完整的角膜及角膜缘后2～3mm的巩膜组织）。保存液为含添加剂的MEM培养液，含2％胎牛血清。培养保存条件为37℃或34℃，5％CO2，95％O2。 角膜内皮细胞的密度评价采用0.3％曲利本兰染液染色后光学显微镜下计数。因经培养后的巩膜角膜片的基质发生高度水肿，在进行临床角膜移植前需对保存片进行脱水处理，因此本研究还观察高分子右旋糖苷对培养后的完整巩膜角膜片的脱水处理及脱水时间对角膜内皮细胞的影响。内皮细胞评价选在培养保存前、保存结束时以及脱水后3个时点进行计数，并计算内皮细胞的丢失率。通过观察培养液性状，培养液抽样微生物培养检查，观察器官培养保存期间的微生物污染的发生情况。 硕士研究生学位论文结果：20只周边巩膜角膜片分成4组；培养保存7天组保存前的内皮细 胞密度为2860．341339．96个／ITln’，保存7天后的内皮细胞密度为 2758．77土301．sl个八mn’；培养保存14天组保存前的内皮细胞密度为 2968．of土1165．97个／llllll’，保存14天后的内皮细胞密度为2673．77 土 1059．43个／mln；培养保存 ZI天组保存前的内皮细胞密度为 2614．ZI i883．52个加f，保存ZI天后的内皮细胞密度为2406．42i 808．68个limn‘；培养保存28天组保存前的内皮细胞密度为3614．74 t 198．97个加奸，保存 28天后的内皮细胞密度为 3234．241 176．37 个W‘；四个组的内皮细胞丢失率分别为 3．45．73％、9．96 2．26％、8刁4土5石3％。10．50士2．62％。 17只完整的巩膜角膜片的保存培养时间 28．6413．19天，在培养 过程中1只发生霉菌性污染，其余16只完整的巩膜角膜片保存前的 内皮细胞密度为 2923．95 97．18个八山n’，保存后的内皮细胞密度为 2695．45 215．38个／nm‘，内皮细胞丢失率为7．75f7．42％。 经过培养后的16只完整巩膜角膜片，分为4组，分别脱水1天。 2天、3天和4天，脱水1天组脱水前内皮细胞密度为2645．66土305．25 个／Injn’，脱水后内皮细胞密度为 2550．54 226．55个人m口’；脱水 2天 组脱水前内皮细胞密度为2571．35土197．15个／inln’，脱水后内皮细胞 密度为 2464．331200．24个加d；脱水 3天组脱水前内皮细胞密度为 2743．76土86．50个IInln‘，脱水后内皮细胞密度为2541石2i85．40个 i‘；脱水 4天组脱水前内皮细胞密度为 2821．05土210．79个／。’， 脱水后内皮细胞密度为 2455．41上 147刀8个加f；四个组的内皮细胞 丢失率分别为3．37．78％、4．16i2．92％、7．2315．87％、12．77t 5．17％。 ．2－ 硕土研究生学位论文结论：器官培养法有效地保存供体角膜时间达4周。结果表明该方法为 安全有效的供体角膜保存技术。脱水时间不应超过3天。本方法的 建立有利于我国眼库技术的发展，使现有的供体材料得到更有效的 利用。