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具有群体感应（QS）系统的细菌能够合成并释放信号分子,当信号分子随细菌密度增加到临界浓度时,就会启动菌体中相关基因的表达,从而调控细菌的群体行为,如生物被膜形成、抗生素产
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具有群体感应（QS）系统的细菌能够合成并释放信号分子,当信号分子随细菌密度增加到临界浓度时,就会启动菌体中相关基因的表达,从而调控细菌的群体行为,如生物被膜形成、抗生素产生、生物发光、毒素释放等。实验室前期分离到一株既能让QS感应菌显色又能产L-氨基酸氧化酶（LAAO）的海洋Pseudoalteromonas sp.R3。LAAO能氧化L-氨基酸产生H2O2,对菌株R3形成氧胁迫。已有研究报道QS能够调控ROS酶促脱毒系统的相关基因来清除ROS。本研究旨在研究菌株R3的QS对LAAO合成的调控机制。首先,我们对Pseudoalteromonas sp.R3进行基因组框架图测序,得到约5.8Mb大小的基因组,GC含量为47.6%,基因预测得到平均长度为944bp的5429个编码基因,占整个基因组的87.8%。分析得知菌株R3基因组中含1个信号分子合成酶基因ahl和7个LuxR家族转录调节子,QseC/QseB、QseE/QseF群体感应系统以及种间群体感应系统。随后,我们通过多种检测方法确认菌株R3能产生AHLs。检测静置培养过程中细胞密度、信号分子和LAAO,以及实时荧光PCR对信号分子合成酶基因ahl和L-氨基酸氧化酶基因lao转录水平进行分析,结果显示菌体密度越大,菌体R3产生的AHLs越多,L-氨基酸氧化酶活力越高,而且ahl和lao表达水平之间存在正相关性。最后,我们尝试构建了信号分子合成酶基因ahl的敲除载体pCVD442/Em-ahl,已将信号分子合成酶基因ahl的上下游同源臂连到敲除载体pCVD442上,但未能成功将红霉素抗性片段连接到载体上。所以无法对Pseudoalteromonas sp.R3进行基因敲除。
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