【摘 要】
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PhSBP1(Petunia hybrida S-RNase-Binding Protein1)是前期寻找自交不亲和花粉因子的过程中发现的一个具有RING结构域的蛋白。体外生化研究证据表明它可能参与了S-核酸酶的降
【出 处】
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中国科学院研究生院 中国科学院大学
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PhSBP1(Petunia hybrida S-RNase-Binding Protein1)是前期寻找自交不亲和花粉因子的过程中发现的一个具有RING结构域的蛋白。体外生化研究证据表明它可能参与了S-核酸酶的降解。但是,对于PhSBP1的功能研究仍然缺乏进一步分子和细胞生物学证据的支持。本论文主要研究了PhSBP1的分子和细胞生物学功能。首先,我们克隆得到了PhSBP1的全长,Southern和Q-PCR分析表明它是一个单拷贝的组成型表达基因,这与之前的发现一致,但发现其在花药中的表达则是最低的。利用酵母双杂和拉拽的方法研究了PhSBP1与S-核酸酶,SLF(S-locus F-box)和PhCullin-G的相互作用以及PhSBP1的自泛素化活性,结果表明PhSBP1仅可以和部分S-核酸酶的高变区互作,与SLF和PhCullin-G不能够发生互作,也未能检测到它具有自泛素化活性。前期工作提示番茄CO(CONSTANS)的一个互作蛋白与SBP1同源。为此,我们还克隆了 PhCOL1(CONSTANS-Like1),通过酵母和拉拽实验验证了PhSBP1和PhCOL1也发生相互作用。Q-PCR分析表明两者都是具有节律表达模式的组成型基因。进而,我们通过瞬时表达研究了 PhSBP1的亚细胞定位,结果表明它是一个核定位的蛋白。有趣的是,蛋白结构域分析发现PhSBP1含有一个SMC(Structural Maintenance of Chromosome)类似结构域,而SMC蛋白是调控染色体结构和运动的重要蛋白。连续观察瞬时表达的洋葱表皮,我们发现 PhSBP1与洋葱表皮染色体的致密化过程相偶联,而对于瞬时转化的拟南芥原生质体则造成原生质体的死亡。综合这些研究结果,我们认为PhSBP1是核定位的持家基因,并且编码一个新的 SMC类蛋白。本文进而对它如何调控染色体致密化,生物学功能及其在自交不亲和的可能作用进行了讨论。
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