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在禽流感(avian influenza virus，AIV)众多亚型中，以H5、H9亚型禽流感病毒对我国养禽业的危害最大。目前，禽流感预防主要采用全病毒灭活疫苗，该疫苗存在着免疫剂量大，并且依赖于鸡胚生产，灭活不彻底，干扰流行病学的血清学监测等缺点。因而迫切需要研制一种高效新型的疫苗来预防禽流感。近年来以杆状病毒表达系统为载体的疫苗成为研究热点，杆状病毒可以刺激机体的天然免疫系统，而其介导的外源基因在体内表达后又可刺激机体产生特异性免疫反应，这些为开发杆状病毒作为疫苗的载体提供了理论基础。本研究旨在应用杆状病毒表达系统为载体，分别构建H5N1亚型AIV(A/Chicken/Guangzhou/M/2008)株和H9N2亚型AIV(A/Chicken/Guangzhou/V/2008)株禽流感杆状病毒双表达载体疫苗。此种疫苗的特点是：不但可以在杆状病毒表面展示禽流感的HA蛋白，而且杆状病毒基因组中所携带的HA基因可以通过转导的作用，使其在动物细胞内得到表达，即此类疫苗既可以作为亚单位疫苗也可以作为DNA疫苗。
本研究应用PCR方法获得了H5N1亚型AIV(A/Chicken/Guangzhou/M/2008)株和H9N2亚型AIV(A/Chicken/Guangzhou/V/2008)株的HA基因，分别亚克隆到表面展示质粒pBACsurf-1，获得重组质粒psurf-H5/H9 HA;分别设计引物扩增psurf-H5/H9 HA重组质粒的gp64-HA基因片段，亚克隆到质粒pcDNA3.1(+)，得到重组质粒pCMV-surf-H5/H9 HA;分别设计引物扩增重组质粒pCMV-surf-H5/H9 HA的CMV-gp64-HA基因片段，亚克隆到杆状病毒转移质粒pFastBac-Dual-VSVG。利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统和脂质体法转染sf9昆虫细胞，分别获得重组杆状病毒BV-Dual-H5和BV-Dual-H9。间接免疫荧光试验、Western-blotting和免疫电镜检测结果表明，重组杆状病毒BV-Dual-H5和BV-Dual-H9可以在转导哺乳动物细胞后表达HA蛋白，并在杆状病毒表面展示HA蛋白。将重组杆状病毒BV-Dual-H5和BV-Dual-H9分别以109pfu/mL的剂量免疫BALB/c小鼠。试验结果表明，在6周龄首次免疫后第三周，BV-Dual-H5和BV-Dual-H9免疫组和相应的DNA疫苗对照组均可检测到特异的HI抗体和中和抗体。第二次免疫之后，BV-Dual-H5和BV-Dual-H9免疫组HI抗体和中和抗体水平随之明显升高，均极显著地高于各对照组(P＜0.01)。第二次免疫三周后，分别用禽流感病毒H5N1亚型AIV(A/Chicken/Guangzhou/M/2008)株和H9N2亚型AIV（A/Chicken/Guangzhou/V/2008）株进行相应的攻毒保护试验。BV-Dual-H9免疫组获得完全保护，BV-Dual-H5免疫组保护率为91.7％(11/12)，均明显地高于各对照组。上述结果表明重组杆状病毒BV-Dual-H5和BV-Dual-H9可以作为防控禽流感的新型候选疫苗。