与转录因子AP-2α相互作用的蛋白质的鉴定

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AP-2α作为一个重要的转录因子AP-2家族的成员,具有组织表达特异性和DNA结合特异性。在胚胎发育,细胞分化,肿瘤发生等方面有重要作用,转录调控多个下游靶基因。为了阐明AP-2α确切的转录调控方式,找出与其直接相互作用的蛋白质因子,我们以AP-2α为饵蛋白通过酵母双杂交对HeLa细胞的cDNA文库进行了筛选。筛选得到两个阳性克隆,测序后经Blast软件比较基因库确定这两个阳性克隆中所含cDNA分别为已知基因TESTIN和ACTN1的片段。目前对TESTIN基因的功能研究还不多,其蛋白C端含有3个LIM结构域,可能是一个抑癌基因。ACTN1编码辅肌动蛋白1,则是公认的与细胞骨架和细胞通讯有关的基因。将这两段筛选所得cDNA片段和AP-2αcDNA全长及AP-2αcDNA的分段形式用GST基因融合系统进行表达,并用AP-2α的单克隆抗体检测了GST-AP-2α融合蛋白表达的情况。虽然所提取的融合蛋白GST-AP-2α出现较多降解,但是电泳迁移率变动分析显示其仍然具有良好的DNA结合活性。所获得的GST-TESTIN,GST-ACTN融合蛋白用于多克隆抗体的制备。用制备所得的抗GST-TESTIN血清和抗GST-ACTN血清及AP-2α的单克隆抗体分别检测了这三种蛋白质在HeLa细胞中的表达。结果显示三种蛋白在HeLa细胞中均有表达,且AP-2α主要表达于细胞核提取物中;TESTIN大部分表达于细胞质提取物中,细胞核提取物中也有少量;ACTN1既表达于细胞质又表达于细胞核提取物中。AP-2α与这两种蛋白的相互作用的进一步证实可能与AP-2α在细胞内的分布有关,对AP-2α调控基因转录的方式可能有重要的补充意义。
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