奶山羊卵巢microRNA文库的构建及生物信息学分析

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microRNA在卵巢、卵细胞和早期胚胎等繁殖相关的组织器官的生长发育过程中起着重要的作用,但是有关microRNA调控山羊繁殖性能的研究至今仍未见报道。本试验拟从转录组水平探索山羊产羔机理。本研究通过构建关中奶山经产羊多胎(3-5头)和单胎羊发情期卵巢组织microRNA文库,利用高通量测序技术筛选差异表达microRNA,并利用生物信息学分析基因结构和潜在的功能,鉴定调控奶山羊多羔性状的microRNA,为提高奶山羊产羔率提供试验依据。主要结果如下:1.通过分别对3个低产羔奶山羊卵巢组织混合样本(HBZ01)和3个高产羔奶山羊卵巢组织混合样本(HBZ02)的测序得知,此次solexa高通量测序低产羔奶山羊共获得7859386条原始数据,4911179条(127205种)imiRNA序列,高产羔奶山羊共获得28941514条原始数据,22557422条(454911种)miRNA序列。2.通过对其长度比较得知,HBZ01数据中长度为22nt的序列有2018266条序列,占总数的41.10%;HBZ02数据中长度为22nt的序列有8856575条序列,占总数的39.26%;对其miRNA种类统计同样得知在22nt处富集。3.利用实时定量PCR技术对文库中6种差异表达的miRNA(PC-5p-5964110, bta-miR-181cR-2, eca-miR-34b-3p2ss9AG10CT, bta-miR-425-5pL+1, bta-miR-10bR-1, bta-miR-223)检测,与文库中的结果一致,说明构建的文库质量合格。4.按照miRNA二级茎环结构要求,本试验共预测了241种新miRNA。从表达水平来看,PC-5p-5964110属于高表达。5.高低产羔奶山羊两样本间差异表达的miRNA有630种,其中新发现的就有31种。对所鉴定的630种差异表达的miRNA分析结果统计:487种miRNA在两种山羊卵巢组织中共表达,143种仅在高产羔山羊卵巢组织中表达。聚类分析表明,HBZ01中有2个miRNA与HBZ02相比是差异极显著的,分别是ssc-miR-451R-1和bta-miR-486R-1。
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