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目的:许多研究表明,新生儿处于生理性免疫功能低下的状态,尤其是早产儿,免疫功能更不成熟,造成了感染性疾病的高发病率与高病死率。另外,许多过敏性疾病、自身免疫性疾病的发生也与新生儿期耐受反应与免疫应答反应的发育失衡有关。所以,保证新生儿正常免疫功能的建立,既降低了新生儿的死亡率,也避免了成年后一些免疫性疾病(如支气管哮喘、湿疹、食物过敏等)的发生。新生儿免疫系统中的各类免疫细胞在出生时具有不同的发育成熟度,达到成熟的时间各不相同,其免疫功能建立的过程和机制十分复杂,受许多因素的影响,如胎龄大小、抗原的刺激、母乳中的营养成分和免疫成分、疾病、药物等。以往的研究大多是在某一特定阶段观察不同抗原刺激后T、B淋巴细胞的功能,或者辅助细胞/因子的作用。本研究利用流式细胞仪测定新生大鼠脾脏中CD3、CD20和CD25淋巴细胞的数量,测定腹腔吞噬细胞吞噬率,空斑形成细胞计数,放免法测定乳鼠肠道内sIgA的含量,从而动态地、全面地阐述正常新生大鼠免疫功能的建立过程;利用组织细菌培养,分析细菌在肠系膜淋巴结的移位与CD25/CD3的相互影响,以及抗生素对新生大鼠上述免疫指标的影响,阐述细菌抗原<WP=4>和抗生素对新生大鼠免疫建立的影响,从而为临床保护、促进新生儿正常免疫功能的建立和降低感染率、病死率提供实验和理论依据。方法:1动物分组:SD大鼠160只,雌雄不限,窝别不限,营养中等,生后母鼠喂养,自然断乳。其中包括出生后0天的SD大鼠40只,出生后3天,7天,14天,30天的SD大鼠各30只。从40只0天的SD大鼠随机抽取10只作为抗生素实验组;剩余150只,每同年龄段的SD大鼠随机分成三个组,每组10只,共15组,作为对照组,然后各年龄段取1组,共5组,用于CD3、CD20、CD25阳性细胞的计数及肠系膜淋巴结细菌移位率的测定,再取各年龄段鼠1组,共5组,用于做溶血空斑试验,剩下的5组,用于腹腔吞噬细胞吞噬率的测定。2取材和试验方法:2.1CD3、CD20、CD25阳性细胞计数:对照组动物分别在生后0天,3天,7天,14天,30天处死;抗生素实验组从生后0天开始腹腔注射青霉素(1500单位/克体重/天),每日一次,连续给药7天,于生后第7天处死。每只动物取新鲜脾脏,制成单个核细胞悬液,用流式细胞仪分别计数。2.2溶血空斑试验:绵羊红细胞腹腔免疫实验动物,4天后处死,取脾脏,制成脾细胞悬液,再与绵羊红细胞一同加入琼脂糖,铺于平皿,孵育后计数平板中的空斑数,算出每100万个脾细胞中的空斑形成细胞数(PFC),即为空斑形成细胞数。2.3吞噬细胞吞噬率: 动物腹腔注射淀粉肉汤,3天后腹腔注射鸡红细胞,30分钟后抽取腹腔液,制成薄推片,Wright氏染色,油镜下观察每100个吞噬细胞中吞<WP=5>噬有鸡红细胞的吞噬细胞数,即为吞噬细胞吞噬率。2.4肠道sIgA:动物处死后,分别取盲肠内容物,用放免法检测sIgA的含量。2.5细菌移位率:无菌条件下取肠系膜淋巴结,分别研磨至匀浆,接种于血平板,只要有细菌生长,即表明该动物发生了细菌移位,细菌移位率=每组动物发生细菌移位的动物数/10×100%。3统计分析:所得数据用SAS统计软件分析,数据表达采用均数±标准差,以P<0.05具有统计学意义。结果:1新生大鼠免疫功能建立1.1细胞免疫功能的建立:CD3和CD25阳性细胞数量在生后呈逐渐上升的趋势,表现在CD3计数由生后0天的22.0±2.6逐渐增加到生后7天的36.0±2.1,30天时达到45.16±3.0,CD25由生后0天的0.5±0.6逐渐增加到生后7天的4.9±1.2,30天时达到9.1±0.9。1.2体液免疫功能的建立:1.2.1CD20细胞计数在生后各年龄组段基本维持于8.2±0.7~9.1±0.8,各组之间的数量比较无统计学意义(P>0.05);1.2.2空斑形成细胞(PFC)计数:在生后各年龄组段维持于39.7±9.4~50.8±7.3,各组之间比较无显著差异(P>0.05)。1.3非特异性免疫的建立:腹腔吞噬细胞吞噬率在生后0天、3天、7天分别为6.2±3.1、9.9±2.7、11.5±3.22,增长曲线平和,生后14天迅速上升至20.4±2.9,30天时达到23.8±2.3,7天组与14天组之间相比有显著差异(P<0.05),其增长趋势呈先慢后快。1.4肠道局部免疫功能的建立:乳鼠肠腔中sIgA的浓度0天时为0,在生后3~7天达高峰(0.43±0.04μɡ/ml),此后逐渐下降,14天时为0.27±0.02μɡ/ml,30<WP=6>天时为0.22±0.03μɡ/ml。2新生大鼠免疫建立过程中相关因素的观察2.1细菌抗原的影响:CD25/CD3在生后0天、3天、7天、14天、30天分别为0.02±0.03、0.09±0.02、0.14±0.03、0.26±0.04、0.19±0.03,在生后14天时为高峰,MLN的细菌移位率在生后在0天、3天、7天、14天、30天分别为0、40%、60%、80%、30%,高峰也出现在14天,CD25/CD3和MLN的细菌移位率具有良好的正相关(r=0.625,P<0.05)。2.2抗生素的影响:与正常对照组比较,抗生素实验组的CD3、CD25、MLN细菌移位率均增高(p<0.05),CD25/CD3、sIgA无明显变化(P>.05)。结论:1 在国内首次观察了新生大鼠免疫功能的建立过程,发现新生大鼠的各类免疫细胞发育程度、速度和机制是不同的,T淋巴细胞总数和活化的T淋巴细胞数逐渐增多,B淋巴细胞的数量在出生时已很充足,且IgM的分泌量较