典型超细矿物粉体的A549细胞毒性作用研究

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本文利用XRF、 XRD、 IR、 SEM等测试方法表征了石英粉体(KWC-Q4、KWC-Q3)、方解石粉体(KWC-C4、KWC-C3)、绢云母粉体(KWC-S4、KWC-S3)、钠长石粉体(KWC-A4、KWC-A3),蒙脱石粉体(KWC-M)和纳米二氧化硅粉体(Nano-SiO2)的化学元素组成、物相、结构、形貌;通过体外毒性实验,借助MTT、Wright–Giemsa染色、SEM、培养过程各生化参数等测试方法和手段,研究矿物粉体样品对A549细胞的存活率、形态、细胞膜损伤程度、代谢能力、氧化还原体系、免疫系统的影响;并通过体外微核试验和单细胞凝胶电泳试验,对矿物粉体样品的细胞遗传毒性进行测试和评价;最后结合矿物粉体的特性及实验结果,探讨了超细矿物粉体对A549细胞的毒性作用机理。研究表明:方解石和钠长石粉体对细胞的存活率影响较小,作用24h后,各浓度组细胞死亡率与对照组相比无显著差异,但当暴露时间延长到48h,细胞的死亡率相对于对照组明显升高。石英粉体和绢云母粉体暴露24h时,随着暴露浓度的增加,A549细胞死亡率明显升高,且呈现较好的剂量-效应关系。蒙脱石粉体和Nano-SiO2对A549细胞的毒性作用较强,在50μg/mL浓度下作用24h时, A549细胞的存活率降低为(53.22±7.94)%和(73.76±2.72)%,随浓度的增高,细胞存活率急剧下降,并在200μg/mL时趋于稳定,细胞存活率约为20%左右。矿物粉体的加入,引起细胞培养液pH和S不同程度的变化,其趋势均是先升高,后缓慢降低。暴露48h后,方解石、石英、Nano-SiO2、钠长石粉体悬液的pH分别稳定在7.15、7.65、7.66和7.35左右,而绢云母和蒙脱石粉体悬液的pH仍有继续降低的趋势;作用24h未引起方解石粉体暴露组A549细胞LDH释放量的增加,其余各组LDH释放量与浓度之间呈现剂量-效应关系,LDH释放量从高到低的顺序为: Nano-SiO2> KWC-M> KWC-Q4> KWC-Q3>KWC-S3> KWC-S4> KWC-A4> KWC-A3。方解石、钠长石和绢云母粉体引起A549细胞内SOD活性随时间变化不显著,方解石和绢云母粉体能引起GSH含量的降低,而钠长石则引起A549细胞内GSH含量的升高;石英、蒙脱石粉体引起A549细胞内SOD活性的普遍升高,呈现一定的剂量-效应关系,GSH含量相对于阴性对照组明显降低;Nano-SiO2在低浓度既已引起SOD活性的显著升高和GSH含量的明显降低,但未呈现剂量-效应关系。与对照组相比矿物粉体浓度为200μg/mL时,A549暴露3h时TNF-α会显著升高,即各组矿物粉体均能引起A549细胞分泌TNF-α,促发炎性反应;方解石和钠长石粉体的暴露未能引起A549细胞IL-6释放量的升高,其他粉体则能引起A549细胞的炎性反应,且与对照组相比差异显著。除蒙脱石粉体之外,实验矿物粉体的暴露均引起细胞微核率的增加,且在相对较低的细胞死亡率条件下,呈现一定的剂量-效应关系,A549细胞微核率: Nano-SiO2>KWC-Q3>KWC-S4>KWC-C4>KWC-S3>KWC-A4>KWC-Q4>KWC-A3>KWC-C3。根据单细胞凝胶电泳实验可得:各种粉体的毒性均处于2级及以下,蒙脱石和Nano-SiO2粉体对细胞DNA造成的损伤最为严重,其次为绢云母和石英粉体,方解石和钠长石粉体对细胞造成的DNA损伤最弱。
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