【摘 要】
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参照GenBank中已经发表的序列,利用DNAStar软件和Oligo6.0软件,针对病毒的保守性基因序列,设计5对引物用于扩增猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)
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参照GenBank中已经发表的序列,利用DNAStar软件和Oligo6.0软件,针对病毒的保守性基因序列,设计5对引物用于扩增猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)目的基因序列。通过对引物浓度、退火温度、Mg2+浓度等反应条件进行优化,建立起鉴别PCV2、PPV、PRV、PRRSV多重PCR诊断方法和鉴别PRRSV、CSFV多重RT-PCR诊断方法。实验结果表明,本实验建立的两个多重PCR诊断方法具有很好的敏感性和特异性,能够对病毒进行快速的鉴别及诊断。应用上述建立的两个多重PCR诊断方法,对来自新疆、山东、吉林和黑龙江地区的179份临床样品进行检测。结果显示,158份样品为PRRSV阳性,阳性率为88.3 %;149份样品为PCV2阳性,阳性率为83.2 %。在179份样品中,一共有128份样品为PCV2和PRRSV混合感染,阳性率为71.5 %。此外,在样品中没有检测出PPV、PRV和CSFV感染。选取检测结果为PCV2和PRRSV阳性的病料通过细胞培养进行病毒分离。对PCV2分离毒株的ORF2基因和PRRSV分离毒株的ORF7基因进行PCR扩增并进行测序。序列分析结果表明,分离的PCV2毒株与GenBank中PCV2 1767 bp基因型处于一个进化树分支内,与PCV2 1767 bp基因型、PCV2 1768基因型的同源率分别在98 %和96 %以上,而与PCV1基因型的核苷酸同源率小于85 %。分离的PRRSV分离毒株与GenBank中PRRSV北美型处于一个进化树分支内,其同源率在90 %以上,而与欧洲型M96262(LV株)的同源率仅为70.2 %。本实验建立的两个多重PCR诊断方法能够对PCV2、PPV、PRV、PRRSV、CSFV单个或混合感染的病毒样品进行快速鉴别及诊断,为病原体的诊断提供了一种新的方法。同时,对PCV2、PPV、PRV、PRRSV、CSFV在猪群中的流行病学调查也具有十分重要的意义。
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