整联蛋白α3β1在肌纤维再生中的作用

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目的:正常情况下,成人的骨骼肌是稳定的组织,具有极其微弱的核的更新。当受到损伤时,骨骼肌显示出快速、广泛的再生能力,以防止肌肉容积丢失。骨骼肌损伤的修复是一个强大的同步化过程,各种不同的细胞反应被激活。受损组织的坏死和活跃的炎性反应是骨骼肌损伤修复的早期表现,随后成肌细胞激活、增生、分化、融合形成新的肌纤维,重建使其具有收缩功能的细胞器。骨骼肌卫星细胞活化是肌纤维再生过程中一个关键因素。研究促进肌纤维再生的相关因素是探索如何促进肌纤维再生的重要方向,也是目前公认的继转基因治疗进行性肌营养不良理论后的另一有效治疗途径。 整联蛋白是细胞粘附受体蛋白,主要通过粘附作用调节细胞与细胞外基质或细胞与细胞之间相互作用,从而启动细胞内一系列信号途径,调节细胞的生长分化。肌纤维再生过程中一系列精细、协调的细胞反应被激活,激活过程在细胞一细胞、细胞一细胞外基质的交互作用中完成。研究粘附分子一整联蛋白α3β1在肌纤维再生过程不同时期的表达,探讨整联蛋白α3β1与肌纤维再生的关系,以及它在肌形成过程中的作用,为进一步研究如何促进肌纤维再生提供理论基础。 方法:将购自美国Walkersville,Md公司的人肌卫星细胞进行原代细胞培养,利用抗结蛋白(desmin)单克隆抗体免疫组化染色对卫星细胞进行鉴定。分别在培养的12小时、3天以及11天对培养的细胞进行抗整联蛋白α3β1(integrinα3β1)、抗desmin单克隆抗体免疫组织化学染色,观察整联蛋白α3β 1在体外培养的肌卫星细胞增殖、分化过程中的表达情况。选择肌纤维再生旺盛的骨骼肌肌病患者18例:杜兴型肌营养不良(DMD)9例、贝克型肌营养不良(BMD)6例、炎性肌病3例的活检骨骼肌标本,行苏木精-伊红(Hematoxylin and Eosin,HE)组织化学染色,抗神经细胞粘附分子(neural cell adhesion molecule,NCAM)、抗整联蛋白α3β1单克隆抗体免疫组织化学染色,观察整联蛋白α3β1在骨骼肌肌病患者再生肌纤维中的表达情况。 结果:1)肌卫星细胞经过48小时潜伏期后开始增生,早期增生较快,之后增生速度减慢。细胞培养24小时,已贴壁,开始延展,表现为圆形或梭形,48小时后表现为梭形,10天细胞生长至汇合。细胞停止增生,开始融合形成肌管,生长培养12天,出现成熟肌纤维,可见收缩现象,13天细胞融合达顶峰,之后两天变化不明显。 2)生长培养第12小时抗结蛋白免疫组化染色后,肌卫星细胞为圆形,细胞核较大,核质比例高;细胞质结蛋白染色阳性。观察1000个细胞,96%为结蛋白染色阳性。确定培养细胞为肌卫星细胞。对生长培养12小时、3天以及11天即静止卫星细胞阶段、成肌细胞阶段、肌管阶段的细胞,进行抗整联蛋白α3β1、抗desmin单克隆抗体免疫组化染色,与对照抗体desmin相比,整联蛋白α3β1在从静止卫星细胞至肌管形成全过程中表达均为阳性。 3)18例患者活检骨骼肌标本连续切片,HE染色,抗NCAM、抗整联蛋白α3β1单克隆抗体免疫组织化学染色,病理分析。HE染色中再生肌纤维特点:直径较小,胞浆嗜碱性,细胞核较大,靠近细胞中央,核浆比例大。NCAM为再生肌纤维标记物,NCAM表达阳性的细胞呈棕染。与NCAM标记的再生肌纤维对照,同一再生肌纤维整联蛋白α3β1也呈阳性表达,伴随肌纤维的成熟整联蛋白α3β1的表达逐渐减弱,至正常成熟的肌纤维中表达消失。 结论:1)体外培养的人肌卫星细胞在静止肌卫星细胞阶段、成肌细胞阶段、肌管阶段均可见整联蛋白α3β1在细胞中呈阳性表达,说明整联蛋白α3β1参与了肌卫星细胞的生长、分化、融合过程。 2)人活检骨骼肌再生肌纤维上可检测到整联蛋白α3β1呈阳性表达,成熟肌纤维中无表达,说明整联蛋白α3β1参与早期肌纤维再生,伴随肌纤维的成熟整联蛋白α3β1在骨骼肌再生中的作用消失。
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