一种香鱼C-型凝集素受体基因的分子克隆和功能研究

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本文对香鱼C-型凝集素受体基因的分子克隆和功能进行了研究。C-型凝集素受体(C-type lectin receptors,CLRs)是一类能识别碳水化合物的重要模式识别分子。但是这些受体在鱼类免疫系统中的作用却知之甚少。本研究克隆了香鱼的一个CLR基因,暂时命名为PaCD209L。PaCD209LcDNA序列全长1464 nt,编码一个约31.5kD由281个氨基酸(AA)残基聚合而成的多肽链,对预测的PaCD209L氨基酸序列与其他鱼类 CLRs的序列多重比对表明,PaCD209L蛋白质分子内含有CLRs的典型特征,但无Ca2+结合位点。序列同源比对和系统进化树分析表明,PaCD209L与虹鳟鱼的CD209aE基因有最高的氨基酸相似性,相似率高达44%。在健康香鱼中,荧光定量(RT-qPCR)检测表明,PaCD209L基因mRNA主要在脑和心脏组织表达。鳗弧菌感染后,在香鱼所有检测的组织和单核/巨噬细胞(Monocytes/macrophages,MO/MΦ)中,PaCD209LmRNA表达水平都上调。我们用原核表达的方法获得了PaCD209L的重组蛋白并制备了其抗血清,免疫印迹分析表明,天然的PaCD209L是糖基化的,并且MO/MΦ中PaCD209L蛋白在鳗弧菌感染后也显著性表达上调。此外,对rPaCD209L的糖结合能力的研究结果表明,rPaCD209L对多糖(肽聚糖和脂多糖)的结合能力明显强于单糖(D-甘露糖和D-半乳糖)。在缺乏或存在Ca2+时,rPaCD209L均能选择性地结合G+菌和G-菌。用抗PaCD209L的IgG抗体封闭该受体后,MO/MΦ对细菌的吞噬能力均明显减弱。
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