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再生障碍性贫血(aplastic anemia, AA)简称再障,是由多种病因引起的骨髓造血功能衰竭,从而导致全血细胞生成减少的一种疾病,也是儿童时期常见的难治性血液病之一,目前有关再障的发病机制尚未完全阐明。自从1904年Chauffard首次提出再障的名称后,人们便对其病因和发病机制进行了不断的探索。以往认为,再障的发病机制主要包括造血干/祖细胞本身的缺陷、造血微环境损伤和免疫异常等；三种机制在不同患者中单独或联合作用,导致骨髓造血功能衰竭。近年来研究认为,再障的发病机制呈明显异质性,免疫介导致病机制在再障的发病中起重要作用,多数再障是T淋巴细胞介导的自身免疫性疾病；用免疫抑制剂如抗人胸腺球蛋白(ATG)以及环孢菌素A(CsA)等能够使70%以上再障患者治疗有效,进一步证实再障患者存在免疫机制异常。T细胞是机体免疫系统中的主要效应细胞,它通过对抗原识别、处理、递呈等作用,从而维持机体免疫功能的生理状态。近年来研究发现,CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell, Treg cell)是具有维持自身免疫自稳作用的T细胞亚群,该细胞数量减少和(或)功能丧失常导致自身免疫性疾病的发生,其分泌的转化生长因子β1(TGF-β1)在这个过程中可能发挥了重要作用；目前有关CD4+CD25+Treg细胞的表面标志物研究较多,但均缺乏特异性；转录因子Foxp3 (foxhead/winged helix transpcription factor P3)已被证实是最可靠及特异的CD4+CD25+Treg细胞内的表面标志,但检测时须破膜固定染色,从而破坏Treg细胞的完整性,影响后续研究。新近研究显示,在正常人外周血T淋巴细胞中CD127和Foxp3的表达呈明显负相关；具有抑制活性的Treg细胞表面低表达CD127,而自身活化的效应T细胞则高表达CD127,因此CD127可以很好地区分调节T细胞及活化T细胞。目前认为CD127是Treg细胞最理想的表面标志物。目前有关调节性T细胞在再障发病机制方面的研究国内外已有少量报道,但多为成人再障方面的研究,在儿童再障中的作用研究较少。研究再障患儿及正常儿童外周血中TGF-β1、Treg细胞及相关基因Foxp3的表达水平,探讨其在再障免疫发病机制中的作用,可能为阐明再障免疫发病机制和寻找新的免疫调控治疗策略提供有价值的实验依据。材料与方法研究对象为30例再障患儿,其中SAA组9例,CAA组21例,正常对照组15例,各组之间性别、年龄差异均无统计学意义。再障患儿均为初治,既往均未输血及接受免疫抑制剂治疗。应用流式细胞术检测外周血Treg细胞的表达水平；提取细胞总RNA,用RT-PCR方法扩增Foxp3基因、扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,用quantiscan分析软件分析条带,以扩增产物条带灰度与β-actin扩增产物条带灰度之比值表示Foxp3 mRNA的相对表达水平；用ELISA法检测’TGF-β1。实验数据以均数±标准差(x±s)表示,采用SPSS 13.0统计软件进行分析,以单因素方差分析进行多组间比较,组间比较采用LSD法,相关分析用pearson线性相关分析方法,以α=0.05为检验水准。结果1与正常对照组相比,急、慢性再障患儿外周血CD4+T细胞、CD4+CD25+及CD4+CD25+CD127low占CD4+T细胞的百分比均降低(P<0.05),且SAA组与CAA组相比,SAA组低于CAA组(P<0.05)。2急性再障患儿外周血中Foxp3 mRNA的表达水平为(0.47±0.08)%,而慢性再障与对照组外周血中的表达水平分别为(0.68±0.14)%和(0.71±0.12)%,(P<0.05),后两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。3急、慢性再障患儿组TGF-β1表达水平分别为(10.72±3.35)和(18.26±5.05)ng/ml(P<0.05),两组与正常对照组(36.88±6.41)ng/ml相比均明显降低(P<0.01)。4相关性分析4.1再障患儿外周血CD4+CD25+CD127lowTreg百分数与TGF-β1表达水平无明显相关性(r=0.136,P>0.05)。4.2急性再障患儿CD4+CD25+CD127lowTreg细胞与Foxp3 mRNA表达水平呈高度正相关(r=0.76,P<0.05)。结论1再障患儿外周血Treg细胞和Foxp3 mRNA表达减低,可能在再障的发病过程中有重要作用,且SAA表达低于CAA,有望用于再障病情严重程度的评估。2血清TGF-β1表达水平减低,可能参与了再障的发病,但与Treg细胞无明显相关性,说明TGF-β1不是引起再障患儿体内Treg细胞下降的唯一因素。