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脂多糖又称细菌内毒素(Lipopolysaccharides,LPS),是革兰氏阴性细菌细胞壁外壁层上的一种特有结构。当奶牛发生瘤胃酸中毒、乳腺和子宫感染以及热应激时,机体内均可产生LPS。LPS对奶牛的危害很大,可引起奶牛发生系统和局部炎症反应,并可导致乳脂率和乳脂产量严重降低,给奶牛养殖业和乳制品加工业造成了巨大的经济损失。目前已知降低血液中乳脂合成前体物的含量,是LPS导致乳脂肪含量降低的原因之一。LPS还可直接作用于乳腺组织,引起乳腺脂代谢功能的改变,但关于LPS干扰乳腺中脂代谢功能的机制尚不完全明确。因此,本试验以原代培养的奶牛乳腺上皮细胞(Dairy cow mammary epithelial cells,DCMECs)为模型,研究LPS对DCMECs乳脂合成功能和脂代谢相关分子的影响,为明确LPS在影响乳腺脂代谢中的作用机制提供研究基础。试验采用胶原酶Ⅰ与透明质酸酶混合消化法体外培养DCMECs;采用不同浓度胰蛋白酶消化法分离纯化DCMECs后,经细胞形态学观察、免疫荧光鉴定、细胞生长曲线绘制和乳脂肪乳蛋白合成功能分析,确定所培养的DCMECs符合细胞生长的生物学规律,具有正常合成分泌乳脂肪和乳蛋白的功能,且传至15代后生长状态依然良好没有发生形态的改变,可用于后续试验。试验以不同浓度LPS处理DCMECs 24 h,经细胞毒性检测,细胞生长状态观察和炎症因子m RNA相对表达水平的分析,确定LPS的最适工作浓度为10μg/mL。试验以10μg/mL LPS分别处理DCMECs 0、1、3、6、12、24和48 h后,检测了乳脂肪合成关键转录因子:固醇调节元件结合蛋白1(Sterol regulatory elementbinding proteins 1,SREBP1)、肝脏X受体α(Liver X receptorsα,LXRα)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferators-activated receptorsγ,PPARγ)的蛋白表达水平,核移位水平和m RNA相对表达水平及其调控的脂肪酸代谢相关酶:脂肪酸合成酶(Fatty acid synthetase,FAS)、乙酰辅酶A结合蛋白(Acetyl-CoA binding protein,ACBP)、分化抗原簇36(Cluster differentiation 36,CD36)、脂蛋白脂肪酶(Lipoprotein lipase,LPL)和乙酰辅酶A羧化酶1(Acetyl-CoA carboxylase 1,ACC1)的mRNA相对表达水平和脂滴形成功能。发现LPS(10μg/mL)能够降低DCMECs中乳脂肪合成关键转录因子SREBP1、PPARγ和LXRα的转录、翻译和核移位水平及其调控的脂肪酸代谢相关酶ACC1、FAS、ACBP和LPL的mRNA相对表达水平,提高脂肪酸转运酶CD36的mRNA相对表达水平,但总体降低了乳脂肪的产量,并且具有时间依赖性。综上所述,LPS能以时间依赖性的方式调控DCMECs脂代谢相关分子的转录、翻译和核移位水平,进而影响脂肪酸的从头合成和DCMECs对血液中脂肪酸的摄取和转运,最终影响乳脂肪的合成。