【摘 要】
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目的 筛选针对病毒性心肌炎(VMC)细胞模型有效的天然药物成分黄芪三萜类物质(Total Extract of Astragalus，TEA)，观察研究其在VMC外细胞培养模型中的心肌细胞保护作用的机制
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目的
筛选针对病毒性心肌炎(VMC)细胞模型有效的天然药物成分黄芪三萜类物质(Total Extract of Astragalus，TEA)，观察研究其在VMC外细胞培养模型中的心肌细胞保护作用的机制，以及对细胞凋亡调控基因的影响。
方法
建立病毒性心肌炎细胞模型，观察TEA对柯萨奇病毒B组3型(CVB3)病毒感染后的Veto细胞是否有保护作用；采用差速贴壁法培养原代乳鼠心肌细胞，镜下观察心肌细胞搏动次数，使用HE染色和a-actin免疫组化法鉴定培养心肌细胞的纯度。以CVB3病毒感染心肌细胞后，进行细胞病变(CPE)抑制试验：CVB3病毒感染乳鼠原代心肌细胞后，于不同时间加入TEA和病毒，逐日观察心肌细胞搏动次数、细胞病变，MTT染色以比较各组间活细胞数的差别；病毒繁殖抑制实验比较不同分组间TCID50的差别以验证TEA的抗病毒活性。实验以盐酸胍作为阳性对照药。应用流式细胞计量术、DNA Ladder分析凋亡发生的情况，RT-PCR测定C-myc表达变化。
结果
TEA在体外实验中(CPE抑制实验)能有效抑制CVB3引起的在Vero细胞及心肌细胞病变(P<0.01)。病毒繁殖抑制实验的结果为：加药组比病毒对照组TCID50降低两个以上对数值，其药效优于同等浓度的抗病毒阳性对照药物——盐酸胍。流式细胞仪和姬姆萨染色能够观察到CVB3感染心肌细胞后存在凋亡，并显示加药组凋亡细胞比率要小于病毒对照组，但没有观察到明显的DNA Ladder。RT-PCR结果提示TEA能下调凋亡早期基因c-myc的表达。
结论
CVB3病毒感染心肌细胞以后，心肌细胞存在凋亡。通过建立针对病毒性心肌炎细胞水平的筛选模型，证实TEA具有心肌细胞保护作用。其机理涉及：下调凋亡早期调控基因c-myc的表达。
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