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本研究以番木瓜(Carica papaya L.)为试材,比较系统地摸索了影响离体再生的多种因素,建立了番木瓜组织培养高效离体快繁体系,并在此基础上,对目前番木瓜快繁中存在的主要问题(根系质量差)进行了初步探讨,以番木瓜组培生根苗正常根系与膨化根系为材料,开展了番木瓜细胞组织学、形态学的观察与分析,取得的主要结果如下:
(1) 无菌培养体系的建立阶段,采用番木瓜顶芽与侧芽为外植体诱导丛芽,外植体采用的消毒方法为:自来水冲洗10min→饱和肥皂水浸泡20min→无菌水冲洗3次→75%酒精30s→无菌水冲洗3次→4%NaCl0 8min→无菌水冲洗4次→接种至含有0.2%“山农一号”Ⅰ型溶液的培养基中。诱导培养基为:MS+BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+30g/L蔗糖+6.2g/L琼脂。
(2) 不定芽增殖阶段,采用3/2MS+NAA 0.1mg/L+BA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.29g/L的配方为培养基,增殖系数5.08,植株高度理想,生长健壮。
(3) 不定芽诱导生根阶段,采用两步生根法。第一步根系诱导阶段采用正交设计优化出的配方MS+IBA 2.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.2g/L为基本培养基,第二步根系生长阶段采用MS<,0>空白培养基并附加0.05%~0.08%的活性炭。台农一号可达到80%以上的平均生根率,且生根根系质量得到改善,细长,无愈伤。
(4) 移栽阶段使用基质为泥炭土:珍珠岩=9:1的混合基质,代森锰锌灭菌,优化环境控制,可获得78%~100%移栽成活率和健壮的植株苗。
(5) 使用石蜡包埋法制作生根苗正常根系与膨化根系幼嫩根段切片,观察发现膨化根系的膨化部位发生在皮层部分。膨化根系皮层厚度异常增加,细胞体积增大,形状不规则,排列无序;膨化严重的材料,其皮层细胞解体。
(6) 使用EPSON EXPRESSION 10000XL1.0扫描生根苗正常根系与膨化根系,WinRHIZO Pro 2005b对结果进行分析发现,正常根系与膨化根系在根系体积、根系平均直径等指标上存在显著差异,正常根系根径级别主要分布在1~4级(0~1.000mm),而膨化根系根径级别主要分布在6~10级(1.500~2.500mm)。