改性茶皂素/盐双水相体系的构建及对牛血清蛋白分配行为的研究

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传统的双水相体系成相物(葡聚糖、聚乙二醇)具有价格昂贵、粘度大等特点极大地限制了双水相体系的应用。寻求廉价、易得、低粘度的双水相体系,已成为双水相体系工作的研究热点。本文中,发现了一种新型廉价的双水相体系—丁基茶皂素/盐体系,研究了该双水相体系的成相特点,并对牛血清蛋白(BSA)在该体系中的分配行为进行了研究。本实验的主要内容如下:1、(1)合成了丁基茶皂素和环氧丙基茶皂素,并采用L16(45)正交试验优化了合成条件。得出最佳反应条件分别为:反应温度70℃,催化剂质量分数10%,碱化处理时间1.5h,茶皂素与正溴丁烷摩尔比1:8,反应时间为6h,产率最高为81.2%。反应温度70℃,催化剂质量分数20-30%,碱化处理时间1h,茶皂素与环氧氯丙烷的摩尔比1:8,反应时间8h,产率最高为80.8%。并采用改性茶皂素进行成相分析,结果显示丁基茶皂素具有成相能力,环氧丙基茶皂素没有成相能力。(2)采用差热-热重(DSC-TG)、红外光谱(IR)和紫外光谱(UV)对丁基茶皂素的结构进行表征。差热分析结果表明丁基茶皂素的热降解过程发生较大变化,稳定性小于茶皂素;红外分析结果表明丁基茶皂素在2957cm-1,2870cm-1,2924cm-1,2854cm-1,1375cm-1,1504cm1,717cm1有特征吸收;紫外分析结果表明丁基茶皂素特征吸收在201nm处,茶皂素紫外特征吸收在210nm处。2.绘制了丁基茶皂素/盐双水相相图,研究了该体系相体积比变化、相图系线长度、相图系线斜率,以及温度、pH对成相效果的影响。并对该体系上下相粘度进行了测定。(1)相图构建的研究结果表明随着丁基茶皂素含量增加,分相所需盐(硫酸铵、硫酸钠、柠檬酸钠)含量逐渐降低,盐析能力遵循以下顺序:硫酸钠>柠檬酸钠>硫酸铵;(2)丁基茶皂素与盐(硫酸铵、柠檬酸钠)相体积比变化的研究结果表明:随着丁基茶皂素含量增加,相体积比增大,而随着盐含量增加相体积比减小。丁基茶皂素与盐(硫酸铵、柠檬酸钠)上下相体积比变化范围分别为0.9-1.15和0.65-1.05;(3)相图系线长度(TLL)则随着丁基茶皂素含量增加而变大,成相区域变大,丁基茶皂素/硫酸铵体系的成相区域大于丁基茶皂素/柠檬酸钠体系的成相区域;(4)相图系线斜率(STL)则随着丁基茶皂素含量增加而降低,丁基茶皂素/柠檬酸钠体系成相受柠檬酸钠含量影响较大,丁基茶皂素/硫酸铵体系成相受丁基茶皂素含量影响较大;(5)pH对成相影响的研究结果表明:丁基茶皂素/盐(硫酸铵、柠檬酸钠)成相所需盐含量先降低后升高,在pH=6.2时两体系成相所需盐含量最低;(6)温度对丁基茶皂素/盐的影响结果表明:丁基茶皂素/盐(硫酸铵、柠檬酸钠)成相随着温度的升高,成相所需盐含量降低,最佳温度为30℃;(7)丁基茶皂素/盐(硫酸铵、柠檬酸钠)粘度的测定结果表明:PEG2000/盐(硫酸铵和柠檬酸钠)体系所形成的双水相体系上相的粘度范围为70-110mpa·s,下相的粘度范围为15-60mpa·s,上相粘度高于下相粘度。丁基茶皂素/盐(硫酸铵和柠檬酸钠)所形成双水相体系上相的粘度范围为1.0-1.5mpa·s,下相的粘度范围为0.6-1.5mpa.s。3.(1)紫外光谱法研究了不同浓度丁基茶皂素对BSA(牛血清蛋白)-G250(考马斯亮蓝)吸收波长的影响,研究结果表明:当丁基茶皂素浓度小于1.0×10-3g·mL-1时,对BSA-G250的吸收影响较小,当丁基茶皂素浓度大于1.0×10-3g·mL-1,BSA-G250吸收发生蓝移;(2) BSA-G250的分配机理研究结果表明:BSA-G250既分布在丁基茶皂素分子间,也分布在丁基茶皂素所形成的微观结构内;(3)丁基茶皂素含量、pH、温度对BSA-G250的分配行为影响结果表明:随着丁基茶皂素含量的增加,丁基茶皂素/盐(硫酸铵和柠檬酸钠)双水相体系分配系数逐渐增大;随着温度的升高,丁基茶皂素/盐(硫酸铵和柠檬酸钠)双水相体系分配系数逐渐增大,最佳温度为30℃。在该温度下丁基茶皂素/硫酸铵体系的分配系数为3.75和丁基茶皂素/柠檬酸钠体系的分配系数为4.3;随着体系pH的不断变化,丁基茶皂素/盐(硫酸铵和柠檬酸钠)双水相体系在pH=6.2时分配系数达到最大分别为6.2和8.5。
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