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目的:子宫内膜异位症(简称内异症,Endometriosis,Ems)为育龄期妇女常见疾病,发病率高达10％-15％,且呈明显上升趋势,目前病因病机尚未阐明,治疗效果不满意,5年复发率均在40％以上[1],因此对其发病相关因素研究及探索有效的治疗方法十分必要。本课题通过临床和动物模型实验研究,检测HIF-1α与GLUT-1在Ems异位组织中的表达及相互关系,探讨缺氧在Ems发生发展中的作用;并通过对HIF-1α和GIUT-1表达的调节,探索补肾温阳化瘀方治疗Ems的作用机理。
材料与方法:
1临床研究
研究组:按就诊顺序,选取2008年10月-2009年8月在河北省中医院就诊,符合本研究纳入标准、排除标准,同意手术治疗且术前3月未采取过任何与本病症有关的中西医治疗的内异症患者24例,其中:按照临床病理类型选择腹膜型、卵巢型、深部浸润型患者各8例,并于术中由同一资深妇科医生参照AFS-r(revised American Fertility Society,美国生育协会修正分期法)进行分期,Ⅰ～Ⅱ期10例,Ⅲ～Ⅳ期14例,分别在术中收集异位内膜组织并随机选取上述内异症患者在位内膜组织10例,异位组织术后经病理证实均为异位内膜标本。
对照组:10例正常子宫内膜来源于同期非内异症、非子宫内膜疾病行子宫全切术或诊断性刮宫患者,术前3月无甾体类激素治疗史。术后经病理证实均为正常内膜组织。
全部患者均知情同意,两组年龄比较分布均衡,无统计学差异,具有可比性。
2动物实验
选用动情周期正常的健康SPF级雌性未孕大鼠100只,体重200±20g,将100只大鼠随机选取12只设为“对照组”,其余88只参照Jones方法复制腹膜型内异症大鼠模型。制模4周后无菌操作剖腹,测量造模成功的65只大鼠移植物体积为治疗前体积,并按随机数字表法将其分为4组:中药高剂量组(16只)、中药低剂量组(16只)、丹那唑组(16只)和模型组(17只)。中药高、低剂量组分别按61.76g/kg、15.41g/kg(相当于临床成人剂量的20倍、5倍)给予补肾温阳化瘀方溶液(由肉桂、制附子、延胡索、小茴香、川芎、桑寄生、没药、川楝子、党参、白术、川牛膝等组成)灌胃;丹那唑组给予100mg/kg丹那唑水溶液灌胃;模型组及对照组每日灌服蒸馏水2ml,每日一次,连用4周。末次给药后,禁食8小时,断头处死,无菌操作再次剖腹,肉眼观察各异位组织形态的差异,测量并记录异位灶体积,取各组异位内膜组织,吸去血液,于4％多聚甲醛溶液中固定。
3观察项目与数据处理
3.1以游标卡尺测量移植物治疗前后体积,比较各组移植物治疗前后的体积变化。
3.2所有标本常规石蜡包埋,5μm厚连续切片5张,1张经苏木精-伊红染色(Hematoxylin-eosin,HE),以病理确诊;4张应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法(S-P法)染色,检测HIF-1α、GLUT-1在各组异位内膜组织中的表达。
3.3统计学处理
SPSS13.0统计软件进行统计处理,数据用均数±标准差(-x±s)表示,组间及治疗前后体积变化比较用t检验分析,检验结果以P＜0.05为有统计学意义。
结果:
1临床研究
HIF-1∝、GLUT-1在Ems在位内膜及异位内膜均有表达,与对照组比较有显著性差异(P＜0.01)。HIF-1α在异位内膜的表达均显著高于在位子宫内膜(P＜0.01),深部浸润型、卵巢型和腹膜型异位内膜之间HIF-1α的表达无明显差异(P＞0.05)。GLUT-1在异位内膜的表达均高于在位子宫内膜(P＜0.01),在卵巢型、深部浸润型和腹膜型异位组织之间的表达无统计学意义(P＞0.05)。
HIF-1α、GLUT-1的表达随Ems病变程度的增加而加强,HIF-1α、GLUT-1在Ⅲ～Ⅳ期Ems异位组织的表达显著高于Ⅰ～Ⅱ期异位组织中的表达(P＜0.01)。
2动物实验
与对照组在位内膜相比,HIF-1α在模型组异位内膜的表达显著升高(P＜0.01);中药高、低剂量组及丹那唑组与模型组比较能显著降低HIF-1α的高表达(P＜0.01),且与对照组比较无明显差异(p＞0.05),其中:中药高剂量组抑制HIF-1α表达效果最好,与丹那唑组比较有差异(P＜0.05),中药低剂量组与高剂量组及丹那唑组比较无明显差异(P＞0.05)。GLUT-1在模型组异位内膜的表达与对照组在位内膜相比显著升高(P＜0.01);中药高、低剂量组及丹那唑组均能够显著抑制GLUT-1的高表达(P＜0.01),与对照组表达无明显差异(p＞0.05),且以中药高剂量组作用效果最显著,中药低剂量组次之,丹那唑组与中药高剂量组比较抑制效果有差异(P＜0.05)。
组织学观察:与对照组比较,模型组异位病灶与腹膜广泛粘连,有的呈囊性小泡或囊实性。经中药高、低剂量及丹那唑治疗后异位灶体积明显缩小,有的已消失仅呈痕迹。比较移植物治疗前后体积,中药高剂量组体积缩小最显著(P＜0.01),中药低剂量组及丹那唑组治疗后体积减少亦有统计学意义(P＜0.05),模型组前后体积变化无明显差异(P＞0.05)。
结论:
1.HIF-1α在内异症异位组织中高表达,提示异位组织中存在缺氧现象,缺氧可能是内异症发病的一个重要诱因。
2.GLUT-1在内异症异位组织中高表达,可能有利于维持腺体细胞增殖的能量代谢平衡,促进内异症的发生。
3.HIF-1α、GLUT-1在内异症患者异位组织中的高表达与异位病灶发生部位无关,与病变程度有关。
4.补肾温阳化瘀方可明显降低HIF-1α、GLUT-1在异位组织中的表达,提示补肾温阳化瘀方可能通过抑制HIF-1α、GLUT-1的表达达到治疗内异症的目的。