趋化抗原基因疫苗的研究

来源 :中国协和医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhouhai3032
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DNA疫苗一直是肿瘤疫苗研究领域的热点。然而,DNA疫苗的潜力有待进一步提高。在本研究中,我们联合应用次级淋巴组织趋化性细胞因子(SLC)和IgG Fc的佐剂效应来提高DNA疫苗的潜力。以HPV 16的E7抗原为模型抗原,以pShuttIe-CMV为真核表达载体,在E7基因的5’端连接SLC,在其3’端连接Fc基因,构建了嵌合体DNA疫苗pSLC-E7-Fc,同时,构建了pE7-Fc、pSLC-E7、pE7、pSLC、pFc和pCMV六种对照质粒。 利用RT-PCR和Western Blotting,证实了包括pSLC-E7-Fc在内的六种质粒都能被真核细胞有效表达。 以E7阳性的免疫原性好的C3细胞和免疫原性差的TC-1细胞为模型,进行了pSLC-E7-Fc疫苗的肿瘤预防与治疗实验。结果表明,在C3肿瘤治疗实验中(初始治疗时肿瘤大小为6mm×6mm),pSLC-E7-Fc免疫使100%的小鼠肿瘤完全消退,并长期生存;而其他组最高的肿瘤完全消退率未超过50%。在TC-1肿瘤预防实验中,pSLC-E7-Fc免疫使100%的小鼠不长瘤,而所有对照质粒免疫的小鼠全部成瘤;用三倍剂量的TC-1细胞对不长瘤的小鼠进行再攻击,仍不出瘤,而对照组出瘤率为100%。在皮下接种TC-1细胞15天后开始免疫治疗,pSLC-E7-Fc疫苗使72%的小鼠肿瘤完全消退,并长期存活。而pE7-Fc免疫仅使28%的小鼠肿瘤完全消退,其他对照组肿瘤持续生长,小鼠全部死亡。当皮下接种TC-1细胞30天后开始免疫,pE7-Fc免疫组平均生存期为71天,而pSLC-E7-Fc免疫组平均生存期延长至91天(p<0.01)。在TC-1肺转移治疗实验中,与pE7-Fc相比,pSLC-E7-Fc免疫显著减少了肺肿瘤结节数(p<0.01)。以上结果说明,与对照相比,pSLC-E7-Fc能更有效地预防和治疗E7阳性的C3和TC-1肿瘤。 为分析pSLC-E7-Fc疫苗抗肿瘤效应的机制,进行了体外淋巴细胞增殖实验、CTL活性检测、抗体滴度检测以及体内CD4和CD8淋巴细胞删除实验。结果表明,与对照质粒相比,pSLC-E7-Fc免疫的小鼠显示了最高的E7特异的淋巴细胞增殖能力、CTL活性和抗体应答,这说明pSLC-E7-Fc可诱导有效的抗原特异性的细胞和体液免疫应答。而且,免疫前体内删除和免疫后体外删除CD4或CD8淋巴细胞表明,CD8淋巴细胞是pSLC-E7-Fc抗肿瘤效应的主要参与者。
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