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植物液泡H+-ATPase(V-ATPase)是一类特殊的膜结合转运蛋白,能够利用水解 ATP产生的能量将质子泵入膜内,从而使液泡酸化,其产生的质子电化学梯度可以用于驱动离子和代谢物质的转运。已有研究表明V-ATPase中的c亚基对逆境环境的响应更为敏感,因此对c亚基的研究业已成为热点。拟南芥c亚基由5个同源基因编码。本论文承接郭荣起和苏杰的工作,继续筛选突变体植株,并将突变体株系进行生物和非生物胁迫实验,观察其对各种逆境胁迫的响应,具体结果如下: 1.经卡那霉素(Kan)筛选得到九株VHA-c3 RNAi沉默突变纯合体株系;经PCR鉴定得到两株vha-c3-1纯合体植株和四株vha-c3-2纯合体植株;经杂交处理共得到五个双突变体株系,即OEA、OEB、RNAiA、RNAiB、RNAiC 2.将VHA-c3突变体植株利用半定量RT-PCR和Northern blot检测目的基因表达量,所有参与检测的RNAi沉默突变纯合体和T-DNA插入型突变体体内的VHA-c3表达量都有不同程度的下降;通过对VHA-c3 RNAi沉默突变纯合体进行基因沉默特异性检测发现其体内的VHA-c3基因沉默是特异的。 3.利用Northern blot检测VHA-c3在接种Pst avrRpm1和Pst DC3000后表达量的变化,结果表明VHA-c3的表达量随着接菌时间(0-48hr)的延长而增加,且Pst DC3000所诱导的VHA-c3基因表达量上调的时间和幅度明显晚于和小于Pst avrRpm1。 4.利用Northern blot发现 VHA-c3的表达量会随着氯化钠处理时间的延长而升高;VHA-c1RNAi沉默突变纯合体、VHA-c3RNAi沉默突变纯合体在25mM、50mM、100mM的NaCl处理下根的相对伸长量低于对照株系;VHA-c1RNAi沉默突变纯合体、VHA-c3RNAi沉默突变纯合体、VHA-c4c2双沉默突变体在125mM的NaCl处理下种子萌发率低于对照株系。 5. VHA-c1RNAi沉默突变纯合体、VHA-c3RNAi沉默突变纯合体、VHA-c4c2双沉默突变体、VHA-c5RNAi沉默突变纯合体在4μM、8μM、12μM的ABA处理下根的相对伸长量高于对照株系。 6. VHA-c1RNAi沉默突变纯合体、VHA-c3RNAi沉默突变纯合体、VHA-c5RNAi沉默突变纯合体在333mM葡萄糖处理下种子萌发率高于对照株系。