120味中药抗流感病毒的实验研究

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目的:研究120味中药单方或复方乙醇提取液对流感病毒的作用,分别用血凝试验,鸡胚实验,细胞模型实验筛选出具有破坏流感病毒血凝素(HA)的单方和复方中药,将有效的中药乙醇提取液制备成药物性口罩和滴鼻液,用于流感病毒感染的预防和治疗。方法:1.血凝试验:初步筛选能破坏流感病毒HA的中药单方和复方。在96孔血凝板中,分别加入50ul稀释成不同梯度的中药提取液;再加入50ul流感病毒H1N1株裂解液(效价1:28),作用2h;最后分别加入100ul0.5%新鲜鸡红细胞悬液,实验设立病毒对照组,红细胞对照组,药物对照组。在三个对照组正常前提下,对药物破坏流感病毒HA做出效果判断;2.鸡胚实验:在鸡胚尿囊腔中接种20ul(20EID50)病毒液,2h后,再接种血凝试验有效的中药20ul(1g/ml),实验同时设病毒对照组、药物对照组和正常对照组。在37℃培养箱中孵育48h,收集鸡胚的尿囊液,测定病毒的血凝滴度,同时观察鸡胚胚体的发育情况。在三个对照组正常的前提下,对药物抑制流感病毒复制做出效果判断;3.流感病毒感染MDCK细胞实验:用Reed-Muench氏法计算流感病毒H1N1引起的TCID50的病毒浓度,用20TCID5020ul流感病毒H1N1株感染MDCK细胞(每孔细胞数2×105个/ml,体积1ml),2h后,加入不同浓度的药物20ul,同时设病毒对照组和正常对照组。18h后收集细胞上清,ELISA方法检测IL-6、IL-2、IFN-γ和TNF-α的含量。在两个对照组正常前提下,对药物抑制流感病毒做出疗效判断。结果:1.血凝试验初筛有效的药物有:自拟方1(大青叶、板蓝根等);自拟方2(炙紫菀、马齿苋等);自拟方3(炙紫菀、苦参、桂枝等);板蓝根;枳壳;川芎;九味羌活汤等。2.鸡胚实验有效的药物有:自拟方1(大青叶、板蓝根等)、自拟方2(炙紫菀、马齿苋等)、板蓝根。3.细胞模型试验:自拟方1(大青叶、板蓝根等)、自拟方2(炙紫菀、马齿苋等)、板蓝根的TNF-α含量与病毒对照组比较,p<0.05,有显著性:自拟方1(大青叶、板蓝根等)IFN-γ含量与病毒对照组比较,P<0.05,有显著性;药物组IL-2和IL-6与病毒对照组比较,P>0.05,有变化趋势,但差别无显著性。  结论:自拟方1(大青叶、板蓝根等)、自拟方2(炙紫菀、马齿苋等)、板蓝根能够通过与流感病毒包膜上HA作用(可能破坏HA或吸附于HA),抑制其与细胞表面特异性受体结合,从而阻碍流感病毒感染宿主细胞;自拟方1(大青叶、板蓝根等)、自拟方2(炙紫菀、马齿苋等)、板蓝根能够提高被感染细胞中IFN-γ含量,增强机体抗病毒感染的细胞免疫功能,同时通过抑制TNF-α的过量产生,减轻免疫性病理损害。为进一步研制具有防治流感的滴鼻液和口罩提供实验依据。
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