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背景：进展性胰腺癌(advanced pancreatic cancer, PC)是一类高转移、易复发、有着极差预后的常见消化道恶性肿瘤。目前临床上并没有明显效果的化疗药物,多药耐药性及癌细胞转移是造成胰腺癌化疗失败的主要原因。雷公藤甲素(triptolide, TP)能在体外通过多种机制显著抑制多药耐药胰腺癌细胞株的生长,显示出了优于吉西他滨的抗肿瘤效果。但雷公藤甲素的非特异性组织分布造成了严重的肝毒性,限制了其向临床转化。核酸适配子(aptamer)是一种能特异性结合到靶细胞表面的单链寡聚核苷酸核,核仁素特异性适配子AS1411具有核仁素(胰腺癌细胞表面高表达)靶向性及较好的安全性；我们以AS1411为“靶头”,以胰腺癌细胞表面高表达的核仁素为药物传递靶点,促使雷公藤甲素特异性靶向并内化入胰腺癌细胞。本研究在体外细胞水平及胰腺癌小鼠模型体内考察了雷公藤甲素-核仁素适配子耦合物的靶向性及抗肿瘤活性,从而为其向临床转化提供了有力证据。目的：本研究作为智能雷公藤甲素-核酸耦合物靶向抗胰腺癌新药开发的一部分,目的是在体内外考察雷公藤甲素-核仁素适配子耦合物的靶向性及抗肿瘤活性,并对其进入细胞途径和抗肿瘤机制作初步探究,为进一步体内的药理,毒理研究及向临床转化提供参考依据。方法：1.体外选择性考察：人胰腺癌细胞系(MIA PaCa-2),人正常胰腺细胞株(HPC-Y5),人正常肝细胞株(L-02)分别与Cy3荧光标记的TP-AS1411耦合物,TP-CRO耦合物在37℃下共孵育一段时间,离心去除未与细胞结合的配体后,荧光显微镜观察细胞内部的荧光分布情况,流式细胞仪检测不同药物处理的各个细胞系的平均荧光强度。2.体内选择性分布考察：雌性裸小鼠10只,建立Mia PaCa-2荷瘤小鼠模型。成瘤后,所有老鼠被随机分为2组(每组5只)：a.Cy3标记的TP-AS1411生理盐水溶液,b.Cy3标记的TP-CRO生理盐水溶液。分别于4,12,24,48小时用荧光成像系统(Xenogen IVIS imaging system)进行活体荧光检测,并于24小时后处死,收集心、肝、脾、肺、肾、肿瘤等组织并检测各自荧光强度。3.体外抗肿瘤活性考察：MTT实验检测不同浓度的TP-AS1411耦合物对人胰腺癌细胞系(MIA PaCa-2)分别在24小时和48小时的杀伤作用,以TP和吉西他滨为阳性对照。免疫印迹法(Western Blot)检测不同浓度药物处理的细胞中及血管内皮新生因子(VEGF)表达水平的变化情况。4.胰腺癌小鼠模型治疗效果评价：雌性裸小鼠建立Mia PaCa-2荷瘤小鼠模型,成瘤后,随机分成5组(每组10只)：a.空白生理盐水溶液(空白对照组),b.雷甲素乙醇／水溶液,c.吉西他滨药物组,d. TP-AS1411耦合物药物低剂量组,e:TP-AS1411耦合物高剂量组。进行治疗试验,以小鼠生存周期、体重、肿瘤生长抑制率为考察指标。每周给药一次,连续给药8周后,结束治疗。麻醉取血后直接处死,血清样本用ELISA检测VEGF表达水平,将实体瘤剥离,称瘤重,并拍照。结果：1. TP-AS1411耦合物与Mia PaCa-2细胞结合的荧光强度明显高于其它与其它细胞结合的荧光强度。而对照组药物与三种细胞结合的荧光强度几乎没有区别。2.对于TP-AS1411耦合物组,肿瘤部位的Cy3荧光信号在整个实验过程中一直都很明显,而在其它正常组织中的荧光信号相对较弱,且在24h后几乎完全消除。对于TP-CRO对照组,Cy3荧光信号的分布没有表现出明显的特异性,且48h时在肝、肾脏等组织中依然能检测到较强的荧光信号。3.随着三种药物浓度的增加及药物作用时间的延长,Mia PaCa-2细胞的存活率都有不同程度的降低,而且表现出了时间剂量依赖性,相同浓度下TP-AS1411对Mia PaCa-2的生长抑制率总要高于吉西他滨对它的(25nM-200nM)。在50nM,100nM及200nM的浓度梯度内,TP-AS1411耦合物都能有效的抑制Mia PaCa-2细胞系中VEGF的表达。4.用药第4,8周后,TP-AS1411耦合物高剂量组抑瘤率分别为56.33%和74.29%,TP-AS1411耦合物低剂量组抑瘤率为48.27%和67.24%,吉西他滨对照组抑瘤率分别为40.29%和44.35%。ELISA结果显示,经过TP-AS1411耦合物干预后,荷瘤鼠外周血中VEGF含量得到显著水平的降低,接近正常水平。结论：1.TP-AS1411耦合物在体外能选特异性地靶向Mia PaCa-2细胞,而规避其它正常细胞。2.TP-AS1411耦合物在荷瘤鼠体内能选择性的在肿瘤组织内大量积聚,而相对减少在其它正常组织内的分布。3.无论是在体内外,AS1411对TP的修饰未影响其抗肿瘤活性及抗肿瘤血管新生活性。