肉毒杆菌毒素A诱导鼠干眼症模型泪腺中致炎因子表达的研究

• 作 者: 刘少义
• 机 构: 大连医科大学
• 出 处: 大连医科大学
• 发表日期: 2007年01期
• 关键词: 干眼症 肉毒杆菌毒素A 泪腺 炎症

目的:干眼症是目前眼科最为常见的眼表疾病,病因繁多,病理过程复杂。随着社会信息化的发展,干眼症的发病率有逐年上升的趋势。现在干眼症已成为一个不容忽视的公共卫生问题,受到越来越多的关注。由于干眼症的病因多种多样,临床表现无特异性,给临床诊治带来极大困难。尤其在治疗方面常采用泪液替代和尽量维持泪液在眼内存留时间的方法进行治疗,但尚未对潜在病因进行治疗。有学者认为眼表面的炎症反应是影响干眼病情十分重要的因素。多数学者倾向将这种炎症反应作为各种不同类型干眼症的共同发病机制。本试验通过建立干眼症动物模型,观察角膜及泪液的分泌情况,同时运用免疫组化等实验方法检测泪腺中炎性细胞因子的存在,为干眼症的临床抗炎治疗提供实验依据。方法:20只健康的8W雌性SD大鼠,体重为200-250g,麻醉后在手术显微镜下暴露泪腺,将大鼠的右侧泪腺注射A型肉毒杆菌毒素(BTX-A)0.05ml(20mu),左侧泪腺注射等量的生理盐水0.05ml,作为对照组。分别于实验前1天及实验后第3天,第1周,第2周,第4周,第6周检测泪液的分泌及观察角膜荧光染色并在照相裂隙显微镜下拍照。注药后第2周,第3周,第4周,第6周分别将动物脊髓离断致死,立即取其双侧泪腺放入4%聚甲醛液中固定24小时,经脱水、透明、浸腊、包埋后切片并行HE染色及免疫组织化学分析。结果:泪腺注射BTX-A后的大鼠,结膜从第2周开始轻度充血,球结膜缺乏光泽,部分鼠的结膜有的出现皱褶,从第1周起即出现角膜上皮缺损,且荧光素钠染色着色。同时用酚红棉试纸检测的泪液分泌减少持续到第4周,以后又逐渐接近正常。而注射生理盐水的对照组角膜荧光素钠染色未见明显着色,检测的泪液分泌未见明显变化。与给药前比较,实验组在给药后的前4周较给药前的泪液分泌值减少,到4周时泪液分泌与实验前比较无统计学差异。实验组给药前角膜荧光素钠染色阴性,给药后从第1周开始角膜荧光素染色阳性,并且随着时间的推移出现染色程度逐渐加重,对照组角膜荧光素钠染色始终阴性。注射BTX-A的大鼠泪腺在第2周及第3周炎性细胞因子IL-6I、L-1β、TNF-α表达阴性,细胞胞浆未染成棕黄色。第4周时测得IL-6I、L-1β、TNF-α表达阳性,细胞胞浆染成棕黄色,有棕黄色颗粒的表达。对照组泪腺在第2周,第3周,第4周,第6周免疫组化均未检测出IL-6、IL-1β、TNF-α的表达,细胞胞浆内很少见棕黄色颗粒的表达。结论:本实验通过泪腺注射BTX-A使泪液分泌减少的方法成功的建立了临床干眼症动物模型,同时从不同时间点来进行BTX-A诱导的干眼动物模型的研究,发现了泪腺中炎性细胞因子的存在,提示干眼发病过程中有炎症反应的发生,这一点为干眼症的发病机制的研究及临床抗炎治疗提供了较为理想的实验依据。