【摘 要】
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[目 的]（1）探究放射后肺腺癌细胞中miR-29a表达变化。（2）探究节律基因Per1和miR-29a对放射后肺腺癌细胞侵袭迁移变化的影响。（3）通过miR-29a对PER1的调控进而影响放射后肺腺癌细胞侵袭和迁移,初步揭示放射后肺腺癌细胞侵袭迁移改变的相关生物学机制。[方法]（1）通过体外诱导A549细胞节律基因Per1表达,X射线照射后分别于不同时间收集细胞,检测细胞中miR-29a表达。（
【基金项目】
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国家自然科学基金（81860536）；
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[目 的]（1）探究放射后肺腺癌细胞中miR-29a表达变化。（2）探究节律基因Per1和miR-29a对放射后肺腺癌细胞侵袭迁移变化的影响。（3）通过miR-29a对PER1的调控进而影响放射后肺腺癌细胞侵袭和迁移,初步揭示放射后肺腺癌细胞侵袭迁移改变的相关生物学机制。[方法]（1）通过体外诱导A549细胞节律基因Per1表达,X射线照射后分别于不同时间收集细胞,检测细胞中miR-29a表达。（2）诱导A549细胞节律基因Per1表达后:1、敲低Per1基因表达,8Gy X线照射后不同时间检测A549细胞的侵袭和迁移变化,PER1和MMP-2的蛋白表达。2、过表达或抑制miR-29a,X线照射后不同时间检测A549细胞的侵袭和迁移能力的变化,miR-29a、PER1和MMP-2 mRNA的表达变化。检测PER1和MMP-2蛋白的表达变化。3、过表达miR-29a,再转染入Per1过表达质粒,检测Per1表达水平。8Gy X线照射后不同时间检测各组细胞中miR-29a,PER1和MMP-2 mRNA的表达,检测细胞侵袭和迁移能力的改变,PER1和MMP-2蛋白的表达。[结 果]（1）通过 qRT-PCR 检测 miR-29a、PER1、MMP-2 mRNA 的表达,Western Blot检测PER1和MMP-2蛋白的表达:1、敲低PER1在（8GyX射线）放射后24小时、48小时、72小时、96小时中,PER1的蛋白表达呈动态性变化,先增加后减少,MMP-2则呈相反的趋势。2、过表达或抑制miR-29a在放射后4天中,miR-29a、PER1 mRNA的表达量在中呈动态性变化,先增加后减少,MMP-2 mRNA的表达量呈相反的变化,先减少后增加。3、过表达miR-29a、PER1在放射后4天中,PER1的蛋白表达同样先增强后抑制,MMP-2的蛋白表达先抑制后增加。（2）通过Transell实验检测细胞的侵袭迁移的能力。1、敲低PER1的基因表达在放射后4天中,PER1敲低组相较于对照组,A549细胞的侵袭和迁移能力增强2、过表达或敲低miR-29a在放射后4天中,过表达miR-29a后A549细胞的侵袭和迁移能力减弱,敲低miR-29a后A549细胞的侵袭迁移能力增强。3、过表达miR-29a、PER1在放射后4天中过表达miR-29a、PER1的A549细胞的迁移能力减弱。4、在放射后4天内,A549细胞的侵袭迁移能力呈动态性变化,先减弱后增强。[结 论]（1）TPA诱导后肺腺癌细胞中miR-29a呈周期性变化,变化周期约为24小时。（2）Per1和miR-29a对放射后肺腺癌细胞侵袭迁移具有抑制作用。（3）放射后肺腺癌细胞中miR-29a、PER1 mRNA和蛋白的表达呈动态性变化,先增加后减少。（4）miR-29a通过调控PER1的表达影响放射后残存的肺腺癌细胞侵袭、迁移能力,呈动态性变化,先减弱后增强。
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