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药效物质基础研究一直以来都是多成分中药复方研究的重点和难点,也是探索其药效与配伍组合机制的基础与必经之路。此外,对中药复方药效物质基础的研究,亦可为优化处方,制定科学的制剂工艺提供参考。一方面,对中药复方药效物质基础的研究,首先应清楚其化学成分组成;另一方面,中药复方多成分的复杂性决定了其在体内的作用形式并不像化药那样单一,代谢在复方于体内的存在形式中扮演着重要的角色。针对多数药物而言,复方多成分暴露于体内的形式才有可能是其真正发挥药效的作用形式。随着分析测试技术的发展,对复方多成分的代谢研究越来越深入,其中液相-质谱联用(U/HPLC-MS/MS)技术已经成为复方代谢分析的有力工具。本文通过对五味降压方化学成分研究以及由序贯代谢合并单成分-单味药-复方的代谢分析研究模式探索行之有效的复方药效物质基础研究方法。主要研究内容与结果如下:1.建立五味降压方水提物及其单味药材的液质联用分析方法。首先,根据质谱响应确定样品分析浓度以及正负离子模式,其次建立分离度良好的液相梯度洗脱方法。为了检测到更全面的物质信息,对五味降压方水提液分别在ESI正负离子模式下进行质谱分析,其中黄酮类化合物、二萜醌类化合物、酰胺类化合物在正离子模式下响应良好,酚酸类化合物在负离子模式下响应良好。结果在ESI正负离子模式下,根据分子离子峰精确分子量信息在1Oppm的质量偏差范围内计算其可能的元素组成,根据二级质谱碎片信息、文献报道数据、保留时间及对照品对照,在五味降压方水提液中共推测鉴定出77种化合物,其中异黄酮类成分36个全部来自于葛根;二萜醌类成分11个全部来自于丹参;酚酸类成分20个主要来自于丹参、牛蒡根两位药材;酰胺类成分3个全部来源于地骨皮;此外2个生物碱成分来自地骨皮,3个有机酸和2个黄烷醇成分来自于山楂,山楂、地骨皮、牛蒡根中皆含有化合物绿原酸(5-caffeoylquinicacid)。此研究较为全面地分析了五味降压方水提液的化学成分信息,为其开展后续各项研究提供了化学物质基础。2.建立了五味降压方的代谢分析模型,分别运用在体和体内模型分析五味降压方多成分的代谢情况。结果在五味降压方水煎液大鼠肠吸收血浆样品中检测到27个原有成分,五味降压方大鼠灌胃血浆样品中检测到14个原有成分,由结果可知,五味降压方水提液中的一些成分不易被肠道吸收,或被肠壁酶代谢以代谢后的形式进入血液;更有成分经肠吸收入血后在肠道菌群及肝药酶的作用下发生代谢。由此可见,生物体内过程对五味降压方的物质基础影响很大,说明五味降压方中的起效成分不仅只是其中的组成成分,还可能是组成成分在机体代谢后产生的代谢产物。3.选取五味降压方葛根药材中5个代表性成分葛根素、3’-羟基葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素,以序贯代谢的方法对其在大鼠体内的代谢过程进行研究,一方面通过分析其代谢途径总结异黄酮类化合物的代谢规律,以期从单成分-单味药-复方的研究思路分析复杂的复方多成分代谢情况;另一方面,分析各成分的主要代谢产物与代谢部位,为体外代谢实验及药效研究提供参考。同时,尝试从代谢转化的角度寻找复方多成分微量达效的原因。结果表明5个单体成分,除葛根素主要以原型暴露于大鼠血中外,其他成分在进入体循环前均发生了严重的代谢,说明复方多成分在体内的起效部分可能是其经机体代谢后的形式。其中大豆苷、染料木素均可以代谢成大豆苷元,3’-羟基葛根素可以代谢成葛根素,成分之间发生了代谢性相互转化,表明复方中的多成分可以通过代谢增加其在体内的浓度,从代谢转化的角度阐述了中药多成分微量达效可能存在的作用机制。