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miR-21是近年来发现的一种小RNA分子，在肿瘤发生及机体免疫调控中发挥着重要的作用。miR-21可通过调控IL-12、TLR4和NF-kB等基因的表达，影响机体的免疫力，在抗微生物感染中发挥重要作用。经miRNA在线靶目标预测软件分析发现，miR-21靶基因中有许多黏附相关因子，而肠产毒性大肠杆菌(Enterotoxigenic E.coli，ETEC)通过产生的黏附素与细胞表面受体结合，介导细菌黏附宿主细胞，是ETEC感染致病的前提条件。但有关miR-21对ETEC黏附宿主细胞的调控机制尚属未知。为研究miR-21对ETEC黏附Hela细胞的调控作用，本研究应用脂质体将pcDNA?6.2-GW/EmGFP-miR-21真核表达载体转染到Hela细胞中，并按ETEC:Hela=100:1的浓度作用不同时间，利用MTT法和Giemsa染色法检测miR-21对ETEC黏附Hela细胞的影响，同时利用实时荧光定量PCR方法检测不同作用时间Hela细胞CCL20、TGFBI、ITGB8等黏附相关基因表达变化，以揭示miRNA-21对ETEC黏附Hela细胞的影响与调控机制。主要研究结果如下：
1. 将重组miR-21真核表达载体和阴性对照分别转染到Hela细胞中，ETEC与过表达miR-21的Hela细胞相互作用不同时间后，MTT法检测结果显示，过表达miR-21的Hela细胞黏附的ETEC数量比转染对照组黏附ETEC显著减少（P＜0.05)，说明miR-21能抑制ETEC黏附Hela细胞。
2.ETEC黏附过表达miR-21的Hela细胞后，经Giemsa染色后观察，可见大量紫色的杆状细菌紧密黏附于Hela细胞表面，细胞中蓝色为细胞核。倒置显微镜下在每个试验组随机选取100个Hela细胞进行细菌计数。结果显示，过表达miR-21的Hela细胞组黏附细菌数量要比阴性对照黏附细菌数量显著减少（P＜0.05)，进一步证实miR-21能抑制ETEC黏附Hela细胞。
3.将重组miR-21真核表达载体和阴性对照分别转染到Hela细胞中，ETEC与转染miR-21的Hela细胞相互作用不同时间后，实时荧光定量PCR检测结果显示，过表达miR-21的Hela细胞与转染阴性对照的Hela细胞相比，60min后CCL-20、TGFBI、ITBG8 mRNA表达水平分别下调1.74倍、2.11倍、3.47倍；90min后分别下调1.92倍、2.35倍、2.36倍；120min后分别下调2.33倍、3.01倍、2.49倍；150min后分别下调2.77倍、3.29倍、2.74倍；180min后分别下调3.49倍、3.92倍、2.73倍。表明miR-21能下调CCL-20、TGFBI、ITBG8基因水平的表达。
上述结果表明，miR-21可抑制ETEC黏附Hela细胞，并通过降低Hela细胞中CCL-20、ITBG8、TGFBI基因的表达水平，使ETEC感染Hela细胞下降，从而发挥抗ETEC感染的作用。