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目的本实验以人急性早幼粒细胞白血病HL-60细胞株为研究对象,重点观察丙戊酸钠(VPA)对NK细胞杀伤白血病细胞敏感性的影响,及其增加NK细胞杀伤敏感性的分子机制。同时探讨HDAC抑制因子VPA在促进全反式维甲酸(ATRA)诱导白血病细胞分化或促进冬凌草甲素(ORI)诱导白血病细胞凋亡中的作用。拟为临床联合应用VPA、小剂量ATRA或冬凌草甲素,减少药物用量开辟新型生物治疗模式。方法取对数生长期的HL-60细胞,分别加入不同浓度的ATRA或/和VPA,于37°C、5%CO2饱和湿度下培养1至3天,台盼蓝拒染实验检测细胞增殖变化,FACS实验检测细胞周期、凋亡变化,以及细胞表面CD11b表达变化;CFSE/PI双染法FACS检测NK-92细胞杀伤HL-60细胞活性,再通过FACS或RT-PCR检测HL-60细胞表面NK细胞各类受体配体的蛋白及基因表达情况;取对数生长期的HL-60细胞,分别加入不同浓度的ORI或/和VPA,于37°C、5%CO2饱和湿度下培养1至3天,采用细胞计数法测定ORI和VPA单独和联合应用时对细胞的生长抑制,并用Annexin V/PI双标法流式细胞术检测细胞凋亡。结果单独应用ATRA或VPA能够明显抑制HL-60细胞生长,阻滞细胞于G0/G1期,诱导细胞分化,VPA可以促进ATRA的诱导分化作用。进一步研究发现1mmol/L VPA联合0.5μmol/L ATRA可增强HL-60细胞对NK细胞的自然杀伤敏感性,并与上调HL-60细胞表面MHC-I类相关分子(MICA/B,ULBP)和CD54的表达及下调HLA-ABC有关;在VPA促进凋亡诱导方面,VPA可以协同ORI抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡,两者具有明显的协同诱导白血病细胞凋亡作用(P<0.05)。结论VPA可以明显的促进ATRA诱导白血病HL-60细胞的分化作用,以及促进ORI对白血病细胞的凋亡作用。VPA联合ATRA可以增强HL-60细胞对NK细胞自然杀伤敏感性,这种效应可能是通过两种药物作用HL-60细胞后,升高NK细胞活化性受体配体的表达,降低NK细胞抑制性受体配体的表达,以及增加与NK粘附而实现的。本研究为临床联合应用VPA和小剂量ATRA以增加疗效、降低不良反应提供了实验和理论基础,同时可长期用于白血病的预防,控制残留病灶,提高白血病细胞对宿主免疫监视的敏感性,并为开发类似VPA的HDACi类药物,治疗恶性肿瘤提供了新的思路。并且ORI和VPA具有协同作用,能高效杀灭白血病细胞。ORI和VPA是一种有望应用于白血病临床治疗的新型生物制剂。