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百合科铃兰族开口箭属开口箭中含有多种生物活性成分,这些生物活性成分都具有许多生物功能,其中最主要的成分是甾体皂苷,甾体皂苷已被证明具有抗炎、抗肿瘤、祛痰和镇痛等多种作用。因此对皂苷的提取方法进行探讨优化,获取最佳提取工艺是很有意义的。然而皂苷的提取方法仍不够完善,需要进一步进行探索,本实验就采用了多种处理方法相结合的方式探讨了皂苷的最佳获取工艺,为皂苷的提取优化提供了参考。类风湿性关节炎属于疑难杂症之一,西药治疗该疾病存在着成本高、副作用大等缺点,中药治疗就逐渐成为人们关注的焦点。开口箭中的皂苷在抗炎方面也具有相应的疗效,本实验就研究了用我们所探讨的最佳皂苷提取工艺所获取的皂苷对关节炎小鼠的治疗效果。该研究为开口箭皂苷在关节炎症治疗方面打下了铺垫,为开口箭皂苷最终应用于人类类风湿性关节炎的治疗奠定了基础。本研究先用物理和化学方法鉴定了开口箭的主要生物活性成分,得知开口箭中含有甾体皂苷、黄酮类物质、生物碱和挥发油类成分,而不含酚类和鞣质以及蒽醌类物质。随后又对开口箭皂苷的提取方法进行了探讨。实验首先分别用双蒸水(DDW)溶解开口箭粉末或95%乙醇溶解开口箭粉末,然后又用电磁炉加热法、微波炉加热法或超声波破碎法对开口箭溶解液进行处理,接着用石油醚萃取法或乙醚萃取法进行脱脂萃取,最后都用水饱和正丁醇进行深度萃取,从而获得开口箭总皂苷成分,然后观察、分析和比较了这几种方法的提取效率。实验结果显示:DDW溶解开口箭粉末比95%乙醇溶解开口箭粉末获取的总皂苷含量多,微波炉加热比超声波破碎最终获得的总皂苷含量多,超声波破碎比电磁炉加热获取的总皂苷含量多。石油醚萃取比乙醚萃取效果好。由此表明最佳提取工艺为:用DDW溶解开口箭粉末,用微波炉加热处理开口箭水溶液,用石油醚进行脱脂萃取,最后用水饱和正丁醇再次萃取。本研究最后用第三章优化的皂苷提取流程所提取的皂苷研究了其对类风湿性关节炎小鼠的治疗效果。实验设有正常组、类风湿性关节炎模型组和开口箭皂苷治疗组,实验开始成功用鸡蛋清卵蛋白初次免疫,随后又用弗式不完全佐剂乳化的鸡蛋清卵蛋白再次免疫建立起了关节炎模型,随后又用开口箭皂苷溶液进行灌胃处理,浓度为0.3 g/m L,剂量为20 m L/kg,一天一次,连续进行两周,期间对小鼠的形态进行了观察,并在治疗后测量、比较和分析了不同组小鼠后爪的体积,最后对3组小鼠的关节部位进行苏木精-伊红染色(HE)和抗TNFα免疫组化(IHC)实验研究。实验结果表明,关节炎小鼠表现出人类类风湿性关节炎的相关症状,如:爪子肿胀、畸形和活动能力减弱等,关节炎组小鼠后爪的体积与正常组小鼠相比有极显著统计学差异,开口箭皂苷治疗组小鼠与关节炎小鼠后爪体积相比有极显著统计学差异。HE实验表明,开口箭皂苷治疗后的小鼠滑膜增生明显减轻,关节结构接近正常。IHC实验表明经开口箭皂苷治疗后的小鼠滑膜颜色比关节炎小鼠颜色浅,TNFα的含量比关节炎小鼠低。以上研究为开口箭皂苷对小鼠关节炎的治疗提供了参考,并为进一步深入研究打下了铺垫。综上所述:开口箭中含有多种生物活性成分,例如:甾体皂苷、黄酮类物质、生物碱和挥发油类。本实验获得的最佳皂苷提取流程为:用DDW溶解开口箭皂苷,随后用微波炉加热处理开口箭水溶解液,然后再用石油醚脱脂萃取,最后用水饱和正丁醇深度萃取。用该种方法提取的开口箭皂苷对小鼠类风湿性关节炎具有良好的疗效,可减轻小鼠关节肿胀和滑膜增生,并降低滑膜中的TNFα含量等。