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研究背景和目的:胆囊癌(gallbladder carcinoma,GBC)是最常见的胆道系统恶性肿瘤,发病率居消化道肿瘤第5位。胆囊癌具有明显的种族和区域差异,虽然SEER(Surveillance,Epidemiology,and End Results)评估发现胆囊癌的发病率仅2.5/105人次,但近年其发病率呈明显增长趋势,发展中国家胆囊癌的发病率可高达15.3/105人次。胆囊癌早期表现无明显特异性,进展快,可通过直接浸润、淋巴转移、血运转移等进行广泛扩散,致使早期诊断十分困难,大部分患者发现胆囊癌时往往已处于中晚期,疗效和预后极差,病死率高。手术是目前唯一的可能治愈胆囊癌的方法,但胆囊癌患者放化疗不敏感,术后复发率高,中位生存期仅6个月,5年生存率不足5%。因此,探索胆囊癌的新型化疗手段迫在眉睫。广藿香酮(patchoulenone)是中药广藿香的重要组成活性成分之一。具有杀虫、抗菌、抗炎和免疫调节等多种生物活性作用。近几年研究发现,广藿香酮在前列腺癌和结肠癌中可通过诱导肿瘤细胞的凋亡和自噬,发挥较强的抗肿瘤活性,但有关广藿香酮对胆囊癌的研究目前尚无报道。因此,本研究旨在探讨广藿香酮在体外及体内对人胆囊癌SGC-996细胞增殖、凋亡和周期分布的影响及其可能相关的分子作用机制,为胆囊癌的化疗提供新途径。方法:1、广藿香酮诱导胆囊癌SGC-996细胞凋亡及周期阻滞通过MTT实验、克隆形成实验观察广藿香酮对胆囊癌SGC-996细胞体外增殖能力的作用;利用流式细胞仪及Hoechst33342染色分析广藿香酮对胆囊癌SGC-996细胞凋亡及细胞周期的影响;裸鼠成瘤实验检测广藿香酮在体内对胆囊癌SGC-996细胞的增殖及凋亡的影响。2、广藿香酮诱导胆囊癌SGC-996细胞凋亡及周期阻滞的分子机制通过Caspase活性实验探讨广藿香酮诱导胆囊癌SGC-996细胞凋亡的机制;进一步运用Western blotting实验检测广藿香酮作用后,胆囊癌SGC-996细胞凋亡及周期相关蛋白表达水平情况。结果:1、MTT实验检测不同浓度广藿香酮作用不同时间后对胆囊癌SGC-996细胞增殖的影响发现,广藿香酮可显著抑制胆囊癌SGC-996细胞增殖,且广藿香酮作用浓度越高,作用时间越长,其抑制作用就越明显,呈剂量和时间依赖性。克隆形成实验检测发现,随着广藿香酮浓度的增加,胆囊癌SGC-996细胞克隆形成数目显著减少。流式细胞仪及Hoechst33342染色分析广藿香酮对胆囊癌SGC-996细胞凋亡的影响显示,随着广藿香酮作用浓度升高,胆囊癌SGC-996细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均显著增加,并出现典型凋亡形态改变。我们通过流式细胞仪分析也显示,广藿香酮处理后,随着作用浓度的升高,胆囊癌SGC-996细胞中处于G0/G1期的细胞比例显著下降,S期细胞比例显著上升,表现为S期阻滞。裸鼠成瘤实验发现,广藿香酮处理组裸鼠成瘤体积及重量均显著低于对照组。2、不同浓度广藿香酮处理后,SGC-996细胞内caspase-9和caspase-3活性升高。在蛋白水平,活化型caspase-9、活化型caspase-3及剪切型多聚ADP核糖聚合酶1(poly(ADP-ribose)ployrnerase-1,PARP-1)等凋亡相关蛋白表达量及Bax/Bcl-2蛋白比值明显升高。cyclin D1、cyclin A和cyclin B1等周期相关蛋白表达量明显下降。结论:广藿香酮通过调控线粒体凋亡途径相关蛋白及细胞周期相关蛋白的表达,诱导胆囊癌SGC-996细胞凋亡及发生细胞周期S期阻滞。广藿香酮有望成为一种新型胆囊癌化疗药物。