【摘 要】
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哮喘是一种常见慢性气道疾病,其特点是可逆性气流阻塞、气道炎症、持续气道高反应性和气道重塑。目前,虽然有很多治疗哮喘的药物,包括抗炎药物和支气管扩张药物,但至今还没有
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哮喘是一种常见慢性气道疾病,其特点是可逆性气流阻塞、气道炎症、持续气道高反应性和气道重塑。目前,虽然有很多治疗哮喘的药物,包括抗炎药物和支气管扩张药物,但至今还没有一种药物能够同时有效地治疗哮喘中的炎症和支气管收缩。血管活性肠肽(Vasoactive intestinal peptide,VIP)作为一种由28个氨基酸组成的神经多肽具有多种生物学活性,一方面它可舒张肺动脉和冠状动脉血管、扩张支气管,并具有抗炎作用;另一方面,它也是一种有效的免疫调节剂。这使得VIP在治疗哮喘上具有广阔的应用前景。然而,VIP在体内半衰期极短,导致了它难以在临床上得到应用。为解决这一问题,本论文设计了 VIP与人血清白蛋白(HSA)的重组蛋白,期望在不影响其治疗效果的前提下,延长其在体内的半衰期。本论文通过基因工程技术将由酵母偏好密码子编码的VIP基因与HSA基因连接形成融合基因,并进一步构建了融合基因的真核表达载体pPinkα HC-VIP-HSA,选用毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株PichiaPin 进行诱导表达,SDS-PAGE 鉴定表达产物,VIP-HSA重组蛋白在摇瓶小样里的表达量最高可达0.2 mg/mL;优选出1-4号菌株摇瓶扩大培养,收集的表达上清经硫酸铵沉淀和透析处理后用于下一步实验。为研究VIP-HSA重组蛋白对哮喘的治疗作用,本论文选取Wister大鼠作为实验动物,使用鸡卵清蛋白作为致敏剂成功构建了大鼠哮喘模型,腹腔注射VIP-HSA重组蛋白对其进行治疗。结果显示,与模型组相比,注射VIP-HSA重组蛋白的大鼠哮喘症状得到缓解,血清中IgE的含量降低,与哮喘模型组比,治疗组肺组织切片病理变化不明显。除此之外,还设置了 VIP-HSA重组蛋白隔天给药组也达到了同样的效果,证明VIP-HSA重组蛋白具有治疗哮喘炎症,减轻气道损伤,缓解哮喘症状的作用,也证实与HSA基因融合后VIP在体内的作用时间得到了一定的延长,但VIP-HSA重组蛋白在体内的半衰期还有待于进一步的药代动力学研究。同时,VIP重组蛋白对于支气管的舒张作用及对于哮喘的免疫调节作用还有待于进一步的研究。
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