小麦花粉特异性基因TaPSG719真核荧光表达载体的构建和亚细胞定位

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小麦是世界上最重要的作物之一。尽管配子体发育的分子生物学研究在杂交育种方面具有深远的意义,但目前对它的研究很少。小麦花粉特异性基因TaPSG719在开花的前5天开始表达,表达量在花粉发育的中期迅速增长,在开花的前4天达到最大值,在花粉成熟后表达量迅速下降。虽然生物信息数据库中已有其mRNA序列,但是有关该基因编码蛋白的结构、功能及细胞定位目前仍不清楚。  本论文构建了真核荧光表达载体pAct1Is-mut-GFP-TaPSG719,为TaPSG719基因在真核细胞中的表达提供了基础,并对该基因表达产物进行了细胞定位。用pAct1Is-mut-GFP作为载体,构建TaPSG719基因的真核荧光表达载体,并成功的将pAct1Is-mut-GFP-TaPSG719载体在洋葱表皮细胞中获得瞬时表达,验证了所构建的真核荧光表达载体在真核细胞中表达的可行性。在经过基因枪转化的洋葱表皮细胞中,只能在其细胞壁上看到绿色荧光,推测TaPSG719基因只在细胞壁中表达,可能与细胞壁的形成有关。  在载体构建过程中,摸索了载体构建过程中的条件,丰富了载体构建过程中的实验参数,提高了实验的成功率。在TaPSG719基因的两端分别引入了AccI和NcoI酶切位点,并且把TaPSG719基因中间的AccI和NcoI两个酶切位点运用Overlap-PCR的方法进行了突变。在真核细胞中大量表达TaPSG719蛋白,可以为研究该蛋白的高级结构,进而有望阐明蛋白功能的机制提供材料。这些工作都为将来更为深入的研究TaPSG719蛋白的结构和功能打下了坚实的基础。
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