大豆耐盐碱性快速鉴定方法的建立及耐盐碱基因的初步挖掘

来源 :中国科学院大学(中国科学院东北地理与农业生态研究所) | 被引量 : 0次 | 上传用户:maria76
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大豆是重要的农作物之一,具有丰富的蛋白质、植物油,用于人类饮食、动物饲料和生物柴油等。盐碱胁迫对大豆生长发育产生不良影响,并使其产量严重降低甚至绝收。通过大豆耐盐碱的精细鉴定,发掘和利用大豆耐盐碱种质是研究大豆耐盐碱生理机制、发掘大豆耐盐碱基因的关键一步,但目前已有的筛选方法存在筛选效率较低、大批量筛选时重复性不高等不足。国内外学者通过筛选鉴定获得了较多的大豆耐盐碱品种,并已成功克隆了多个耐盐碱基因。目前已有研究表明,大豆耐盐碱性机制复杂,不同材料的耐盐碱基因不尽相同。本研究建立了一种高效、高通量鉴定耐盐碱大豆种质的鉴定技术,优化了前人的大豆品种耐盐碱筛选技术。在此基础上,通过对突变体库进行筛选,鉴定获得了多个耐盐碱突变体株系,并对耐盐碱基因进行了初步挖掘。1.建立了一种简便的大豆耐盐碱鉴定方法。首先采用蛭石育苗和水培结合的方式,将材料进行批量胁迫处理,获得的耐性材料进一步采用水培的方式精准胁迫处理,采用盐碱等级鉴定方法衡量材料的耐盐碱等级。该方法重复性好,解决了环境影响等因素造成的耐盐碱筛选重复性差的问题;能够满足突变体库、自然群体等大批量资源的筛选。2.大豆品种黑河43是适宜区的主栽品种,具有抗性强,产量稳的优势。本文以黑河43大豆品种为供试亲本材料,利用60Co-γ射线对其进行诱变处理,创建突变体库。将突变体库种植于吉林省大安市盐碱地田块中,进行田间表型鉴定;为解决田间盐碱土分布不均等问题,通过本研究建立的大豆耐盐碱鉴定方法,将获得的表型较好材料于室内进一步筛选。据此获得了耐盐碱株系DA22多个耐盐碱突变株系。3.为挖掘DA22株系的耐盐碱基因,利用DA22与合农85杂交F2代群体375株,进行耐盐鉴定,并将耐性强的个体15株与敏感性强的个体15株进行混池测序,利用QTL-seq及本实验室建立的独特的变异鉴定技术体系等分析方法鉴定候选基因。4.利用本研究优化的的耐盐碱筛选体系对348份大豆自然群体进行耐盐碱等级鉴定;利用已经完成的该自然群体的重测序数据,选取与基因功能性变异相关的SNP标记,利用Farm CPU进行全基因组关联分析分析,初步确定与研究性状相关的候选基因。5.在东生7号突变体库中筛选到一个叶片黄化且下胚轴伸长的突变体eny(elongated note and yellowing),并对该突变体与合丰55杂交的F2群体进行混池测序,通过本实验室建立的独特的变异鉴定技术体系进行分析,获得候选基因Glyma.02G304700。经过对其盐碱性表型鉴定结果发现,eny突变体与野生型胁迫表型并无明显差异。
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