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[目的]1.测定卷柏等36种中药材乙醇提取物及萃取部位的体外抗菌活性,筛选出具有较好抗菌活性的中药材。2.追踪分离卷柏活性部位的化学成分,鉴定其抗菌活性成分。3.测定所得化合物体外抗菌活性。并评价活性成分与临床常用抗菌药物联合应用的体外抗菌作用。[方法]1.采用生物活性导向分离技术(Bioactivity-guidedfractionation),将细菌药物敏感性试验结合硅胶、SephadexLH-20等色谱分离手段,从中草药提取物的活性部位分离纯化单体化合物。用波谱分析技术和理化方法鉴定其结构。2.对分离得到的化合物进行抗菌活性研究。首先,采用微量稀释法(microdilution method)测定其最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。根据测定结果,用K-B纸片扩散法筛选与化合物有联合作用的抗菌剂,进一步采用棋盘式微量稀释法(Checkerboard microdilution method)和时间-杀菌曲线法(Time-Killingcurve),评价化合物与临床常用抗菌药物的联用效果。[结果]1.从卷柏乙酸乙酯层分离得到7个活性化合物,经理化性质及波谱数据鉴定为:银杏双黄酮(化合物1)、扁柏双黄酮(化合物2)、穗花杉双黄酮(化合物3)、金松双黄酮(化合物4)、芹菜素(化合物5)、阿魏酸(化合物6)、咖啡酸(化合物7)。2.测定分离得到的化合物体外抗菌活性,结果显示:它们对各标准菌及其耐药菌菌株均有一定的抗菌作用。3.双黄酮化合物与临床常用抗菌药物联用,棋盘法结果显示:银杏双黄酮与亚胺培南联合抗MRSA,1株为协同作用,2株为相加作用;银杏双黄酮与环丙沙星联合抗PA,2株为协同作用,2株为相加作用。扁柏双黄酮与头孢唑啉联合抗MRSA,1株为协同作用,3株为相加作用;扁柏双黄酮与环丙沙星联合抗MRSA,7株为相加作用;扁柏双黄酮与环丙沙星联合抗PA,3株为相加作用。穗花杉双黄酮与亚胺培南联合抗MRSA,2株为协同作用,1株为相加作用;穗花杉双黄酮与环丙沙星联合抗PA,1株为协同作用,6株为相加作用;穗花杉双黄酮与氟康唑联合抗CA,2株为相加作用。金松双黄酮与头孢唑啉联合抗MRSA,1株为协同作用,3株为相加作用;金松双黄酮与环丙沙星联合抗PA,2株为协同作用,4株为相加作用。4.对于有协同抑菌作用的菌株,进一步进行时间-杀菌曲线考察,结果显示:银杏双黄酮与亚胺培南联合抗MRSA8作用方式为协同;银杏双黄酮与环丙沙星联合抗PA5’作用方式为相加。扁柏双黄酮与头孢唑林联合抗MRSA8作用方式为协同。穗花杉双黄酮与亚胺培南联合抗MRSA8作用方式为协同;穗花杉双黄酮与环丙沙星联合抗PA5’作用方式为相加。金松双黄酮与头孢唑林联合抗MRSA747作用方式为协同;金松双黄酮与环丙沙星联合抗PA5’作用方式为协同。[结论]1.本论文首次对卷柏乙醇提物体外抗菌进行活性追踪,从其活性部位乙酸乙酯层分离得到化合物:银杏双黄酮、扁柏双黄酮、穗花杉双黄酮、金松双黄酮、芹菜素、阿魏酸、咖啡酸。2.银杏双黄酮与亚胺培南联合抗MRSA为协同作用;与环丙沙星联合抗PA为相加作用。扁柏双黄酮与头孢唑林联合抗MRSA为协同作用。穗花杉双黄酮与亚胺培南联合抗MRSA为协同作用;与环丙沙星联合抗PA为相加作用。金松双黄酮与头孢唑林联合抗MRSA为协同作用;与环丙沙星联合抗PA为协同作用。上述化合物与抗菌药物的联用抗菌作用为首次报道。