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牧草是草食动物的主要饲料来源,也是发展畜牧业的前提。但近年来,由于草地退化和荒漠化,再加上蝗灾的危害,致使川西北草地的生态环境更为恶化,严重的影响了我国西部地区畜牧业的发展。由于蝗虫有迁徙性行为,因此蝗虫的防治难度大、化学防治成本高、效果差,并且存在食品安全性和生态安全性等问题。选育抗蝗虫牧草品种是蝗虫防治的根本途径,但却面临育种周期长和抗蝗虫品种资源严重匮乏的限制。利用基因工程技术将杀虫蛋白基因通过遗传转化创建牧草抗蝗虫新材料,具有周期相对较短和不受生殖障碍限制等优点,是抗蝗虫牧草品种遗传改良的一个重要方向。 本研究以川草二号老芒麦(Elymus sibiricus L.)和短芒披碱草(Elymus breviaristatus)的愈伤组织为受体材料,通过根癌农杆菌介导,将来自于类产碱假单胞菌的杀虫蛋白基因转入到受体材料的基因组中,从而培育出具有抗蝗虫特性的转基因牧草新材料。获得的主要研究结果如下: 一).类产碱假单胞菌杀虫蛋白基因(ppip)的功能研究 1.类产碱假单胞菌杀虫蛋白基因(ppip)在大肠杆菌中的表达 由于大肠杆菌的启动子不能识别类产碱假单胞菌杀虫蛋白基因(ppip),因此ppip基因不能直接在大肠杆菌细胞中表达。本研究利用来自大肠杆菌的