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第一部分:锌脂蛋白A20在缺氧肺血管新生中的作用及机制 目的:肺动脉高压是我国临床常见的恶性疾病。慢性缺氧是肺动脉高压的重要诱导因素之一。慢性缺氧诱导的内皮功能障碍和血管新生紊乱失调被视为肺动脉高压发病的重要组成部分。新近研究显示NF-κB调控的锌指蛋白A20可能与缺氧相关。然而，在不同细胞类型中呈现一定的差异。据我们所知，目前A20在缺氧肺动脉血管新生中所发挥的重要作用目前尚不清楚。 方法:本课题通过western blot、免疫组化、免疫荧光和RT-PCR方法检测缺氧大鼠的肺组织及体外培养的肺动脉内皮细胞中A20的表达情况。继而利用小干扰RNA转染方法特异性干扰A20表达后，进行MTT实验、BrdU实验、流式细胞仪和western blot检测细胞增殖情况。应用Boyden小室迁移实验、小管形成实验和western blot分析内皮细胞的迁移、官腔形成和粘附能力。最后，采用NF-κB抑制剂BAY11-7082以及A20小干扰RNA，验证A20与NF-κB之间的相互作用关系。 结果:在缺氧动物模型的肺组织中A20分布在血管内皮中并且呈短暂性增加。与对照组细胞相比，A20沉默后的肺动脉内皮细胞在早期缺氧条件下增殖能力加强。同时，细胞迁移、管腔形成和粘附分子表达情况在A20表达干扰后也明显增加。此外，孵育BAY11-7082后抑制了内皮细胞中缺氧诱导的A20表达，而A20缺乏后导致NF-κB活力进一步提高。 结论:综上，本研究证实了缺氧肺动脉内皮细胞中A20短暂增加。并且抑制A20可导致缺氧早期血管新生作用加强。其作用机制与NF-κB和A20之间的密切的相互调控作用相关。暗示持续缺氧条件下肺动脉内皮细胞中A20增加可能有助于抵制血管新生。这些新的证据为揭示缺氧性肺动脉高压的病理机制提供了重要的理论基础，有利于提出新的治疗方案。 第二部分:15-HETE通过与NF-κB相互作用促进肺动脉炎症反应 目的:本实验室前期研究成果证明15-脂氧合酶(15-LO)/15-羟化二十碳四烯酸(15-hydroxyeicosatetraenoic acid,15-HETE)是肺动脉高压疾病发生发展过程中缺氧性肺动脉血管收缩和重构的中心介导因子。慢性缺氧诱导的血管周炎症细胞浸润与促炎症因子增加，在肺动脉高压的临床病例中已有报道，被视为肺动脉高压疾病的重要病理阶段。然而其病理机制十分复杂，目前尚未明确。本研究的目的在于探索15-HETE在缺氧性肺动脉血管炎症反应中的作用及机制。 方法:首先，15-LO抑制剂，NDGA和CDC，以及15-LO1/2小干扰RNA用于抑制内源性15-HETE。我们采用免疫组化实验，对单核巨噬细胞的浸润情况进行分析。通过免疫组化实验，western blot分析和RT-PCR检测缺氧大鼠模型以及培养的肺动脉内皮细胞中，细胞间粘附分子和血管细胞粘附分子的表达水平。应用western blot，免疫荧光化学和荧光素酶报告基因测定NF-κB的活性。最后，不同浓度梯度的BAY11-7082和PDTC，NF-κB阻断剂，用于明确细胞NF-κB的活性对15-LO蛋白表达的影响。 结果:我们发现缺氧条件下肺动脉血管周单核巨噬细胞的浸润，以及细胞黏附分子的表达，被15-HETE阻断剂或者15-LO1/2小干扰RNA显著抑制。并且，外源性15-HETE可以时间依赖性方式促进两种细胞粘附分子在肺动脉内皮细胞中的表达水平。15-LO1/2代谢产物，15-HETE可促进NF-κB的活性。同时，NF-κB的阻断剂可明显抑制缺氧肺动脉内皮细胞中15-LO1/2的表达。 结论:我们的实验结果表明慢性缺氧促进单核巨噬细胞向血管系统浸润，以及肺动脉内皮细胞中细胞粘附分子表达增加，其作用机制是通过15-LO/15-HETE与NF-κB之间的正性相互作用。 本研究揭示了缺氧诱导的肺动脉炎症反应的新机制，为治疗肺动脉高压这一高危性疾病提供了以15-LO/15-HETE与NF-κB为靶点的新的治疗策略。