【摘 要】
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灵长类胚胎干细胞(ES细胞)不仅能为研究生殖发育生物学基础理论提供良好的模型，而且可为细胞替代治疗提供大量的供体细胞，因此具有重要的研究价值。当前灵长类ES细胞研究还有很
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灵长类胚胎干细胞(ES细胞)不仅能为研究生殖发育生物学基础理论提供良好的模型，而且可为细胞替代治疗提供大量的供体细胞，因此具有重要的研究价值。当前灵长类ES细胞研究还有很多问题需要解决，如分离建立更多的胚胎干细胞系，优化培养体系，提高ES细胞定向分化为特定细胞的比例，研究ES细胞自我更新和分化的机制等。本文一方面概括了灵长类ES细胞的研究进展，另一方面并对制备抗体，免疫外科手术法分离灵长类胚胎内细胞团，建立猕猴ES细胞的无饲养层、无血清培养体系和诱导猕猴ES细胞分化成高纯度的O2A神经胶质前体细胞进行了研究。主要结论如下：1)分别以猕猴脾脏淋巴细胞和人外周血单个核细胞作为免疫原，免疫日本大耳白兔，得到免疫血清。在补体介导的细胞毒作用下，兔抗人和兔抗猕猴免疫血清可以裂解人和猕猴囊胚滋养层细胞，从而分离出内细胞团，用于分离培养人和猕猴胚胎干细胞。2)猕猴ES细胞在以层粘连蛋白(laminin)为胞外基质，含转化生长因子betal(TGFβ1)的无血清培养基(SFM)中可以稳定的增殖至少22代，保持不分化，并具有分化成三个胚层细胞的能力。进一步的研究发现去除TGFβ1后，猕猴ES细胞出现分化，整合素表达降低，推测TGFβ1可能通过促进猕猴ES细胞整合素的表达，加强其与胞外基质的相互作用，从而维持ES细胞的自我更新。然而猕猴ES细胞不能在纤粘连蛋白(fibronectin)和明胶上生长。3)无饲养层、无血清培养体系中长期培养的猕猴ES细胞，分化出拟胚体，14天的拟胚体在血清中分化培养一周后，在含碱性成纤维生长因子bFGF、表皮生长因子EGF和胰岛素+转铁蛋白+亚硒酸钠ITS的培养基中培养，获得97％的O2A胶质前体细胞，得到的O2A细胞能够稳定增殖，并且可以自发分化为II型星型胶质细胞和少突胶质细胞。本实验的结果有助于猕猴ES细胞分离建系和培养系统的优化、推动猕猴ES细胞自我更新和诱导为神经胶质细胞机制的研究，便于建立ES细胞替代治疗的猕猴模型，从而为人类ES细胞的临床疾病治疗提供参考。
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