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巨大血小板病（giant platelet disorders,GPD）是一组异质性疾病,表现为血小板减少,巨大血小板和不同程度的出血。近年来,随着实验室检测技术的进展,新的巨大血小板病不断地被发现,但至今还有相当多的病例不能被分类和鉴定,易造成误诊。在临床实际工作中,我们发现一些巨大血小板病不是血小板本身的病变,而是其它疾病的一种特殊表型。最近我们遇到了一种罕见的病例,患者除表现巨大血小板减少外,还表现为红细胞异形、溶血性贫血和血浆植物固醇明显增高。对这种伴有巨大血小板的特殊病例进行深入细致的研究,有助于临床医生正确的认识此类疾病,及时地作出诊断、鉴别诊断和治疗,并为将来的进一步研究提供理论基础。目的巨大血小板减少与溶血性贫血共存在血液病中十分罕见,而且人们对其认识不清。一些血液病表现为溶血性贫血伴血小板减少,如Evan’s综合征、血栓性血小板减少性紫癜等,但它们的血小板体积不大。1969年由Ducrou等提出的地中海口形红细胞增多症/地中海巨大血小板减少症,临床上表现为口形红细胞增多性溶血性贫血和巨大血小板,但仅见于澳大利亚的Adelaide地区,未见于其它地中海地区,其病因和发病机制不清。1974年Bhaltacharyya等首次报道了植物固醇血症（又称β-谷固醇血症）,它是一种罕见的常染色体隐性遗传性脂质代谢性疾病。特征是植物固醇特别是谷固醇在血液和组织中积聚,从而引起黄色瘤,早发性冠心病、动脉硬化、关节炎等。2005年Rees等首次报道了表现为口形红细胞增多和巨大血小板的植物固醇血症。最近,我们发现了来自江苏盐城的一个家庭的3个孩子自幼表现为溶血性贫血和巨大血小板减少,与地中海巨大血小板减少症相似,但随着年龄的增长逐渐出现皮肤的黄色瘤。为了了解这种血液学异常与植物固醇之间的关系,为了阐明此类疾病发生的分子机制以及将此类疾病与其它巨大血小板病区别开来,我们对此家系的临床、生物化学和分子生物学特征进行了研究。方法第1部分建立特异精确的血浆植物固醇测定方法,以便植物固醇血症的诊断。制备谷固醇、豆固醇和二氢胆固醇标准溶液及收集患者、他们父母和10名正常人非抗凝禁食血2ml。100μl血清或标准溶液用1mol/L氢氧化钾乙醇溶液皂化,正己烷溶液提取,苯甲酰氯溶液衍生。衍生物再用正己烷溶液提取,然后在氮气流下挥发蒸干。非挥发物用100μl四氢呋喃:乙腈（1:1）溶解液溶解后,取10μl注入高效液相色谱（HPLC）进行测定。HPLC仪为美国Agilent1100系统,层析柱为Diamonsil C18,流动相为乙腈和异丙醇（75:25,v/v）,流速为1ml/min。在235nm的波长下测定紫外吸收值。第2部分分析一个植物固醇血症家系的临床特征。光学显微镜观察红细胞和血小板形态。比浊法测定血小板聚集。流式细胞术检测血小板膜糖蛋白（GP）。PCR法扩增ABCG5和ABCG8基因的所有外显子和侧翼序列,DNA测序确定基因异常,限制性内切酶（BfaⅠ）分析该家系及70名正常人相应序列的PCR产物。第3部分用HPLC法检测3名患者、他们父母和6例正常人红细胞膜的固醇含量。将谷固醇与红细胞在体外进行孵育,观察正常人红细胞形态变化并检测其渗透脆性。结果第1部分植物固醇血症患者血浆谷甾醇和豆甾醇浓度明显高于正常人均值。他们父母的谷固醇和二氢胆固醇浓度比正常人均值轻度增高,而豆固醇未见增高。第2部分3名患者临床上主要表现巨大血小板和红细胞形态异常,如球形、口形红细胞和靶形细胞。红细胞渗透脆行增加。出血时间延长、对瑞斯托霉素诱导聚集反应降低。他们血浆谷固醇、豆固醇和二氢胆固醇浓度明显增高而总胆固醇浓度正常。发现在ABCG5基因外显子1中18802位碱基发生C→T突变,导致22位的谷氨酰胺（Q）变为终止密码子。3名患者均为纯合子,其父母及两个亲属为杂合子。对ABCG8基因测序未见异常。限制性内酶BfaⅠ分析70名正常人相应序列的PCR产物未发现相同的基因突变。第3部分3名患者红细胞膜的谷固醇、豆固醇和二氢胆固醇浓度明显增高。谷固醇与红细胞孵育后,红细胞异形明显,可见口形、球形红细胞和靶形细胞。谷固醇组红细胞渗透脆性较对照组升高。结论1.本研究采用改良的HPLC法对血浆植物固醇进行定量检测,该法具有简便快速,灵敏度高,需血样品量小及分离效果好等优点,为植物固醇血症的诊断提供了一种切实可行的检测方法。2.血细胞是血浆植物固醇毒性作用的一个靶子;显著增高的血浆植物固醇导致了红细胞和血小板的异常;红细胞和血小板的异常是植物固醇血症的一种特殊的表型;伴有巨大血小板和（或）难以解释的溶血性贫血的患者需与植物固醇血症鉴别。3.ABCG5基因外显子1上的一个新的无义突变构成了伴有红细胞和血小板异常的植物固醇血症的分子基础。此突变是国际尚未报道的一个新的突变。4.植物固醇血症患者不仅血浆植物固醇含量增加,而且红细胞膜上的植物固醇含量也增加:血浆植物固醇含量的增加对红细胞形态和渗透脆性有明显的影响。