核仁磷酸蛋白B23在调控微管动力学的功能

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核仁磷酸蛋白(B23)是一种多功能的磷酸蛋白,它主要定位于细胞核内,并且快速的穿梭于细胞核和细胞质之间。目前对于B23的研究主要集中在细胞核内它对细胞周期和增值调控,关于B23在胞质内对微管的调控研究还知之甚少。   微管是由微管蛋白的异二聚体构成的管状空间网架结构,它是维持细胞结构和细胞行使各种生理功能的基础结构。细胞对微管的效调控极其精细和复杂生物学过程,微管动力学主要分为两种状态:一种是增长,另一种是解聚,这两种状态的互换是快速并且随机的。微管由长聚合态解聚成短的解聚态的过程叫做catastrophe;由解聚态聚合成长聚合态的过程叫做rescue。这两种过程(增长/解聚)受到各种因子的调控,促进细胞解聚的因子叫做解聚因子,行使相反作用的因子是聚合因子。   本文主要研究核仁磷酸蛋白(B23)调控微管的动力学过程。我们发现作为一种微管稳定因子,B23可以调控微管的动力学过程,并且通过抑制其下游解聚因子的从而保护微管解聚。   通过解聚态/聚合态微管分离实验,我们发现B23的敲除使细胞内的聚合态微管量下降,并且这种解聚不受微管聚合药物紫杉醇的恢复。我们发现,通过同时敲除B23下游微管解聚因子Eg5可以恢复由B23敲除引起的微管解聚,这就说明B23调控微管是依赖于Eg5的解聚功能的。我们通过体内免疫共沉淀发现B23可以和Eg5结合,并且这种结合是直接的蛋白质相互作用。我们进一步通过体外偶联-酶活实验证明B23可以直接通过抑制Eg5的水解酶活抑制微管解聚。   通过以上实验结果,我们证明了B23也是一个重要的微管调控因子,并且这种对微管的调控依赖于下游微管解聚因子Eg5。  
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