论文部分内容阅读
茄子(Solanum melongena L.)作为大众餐桌上即为常见的菜,其富含大量花青素,具有很高的营养价值,其根、茎、叶和种子具有一定药用价值,其萼片也经常出现在餐桌上,具有很好的市场前景。本研究针对于欧洲绿萼茄,东北紫茄,及其两种茄子的杂交茄观察后发现,欧洲进口茄萼片整个生长周期内均为绿色,东北紫茄则随生长周期的推进,逐渐变为萼片全紫,而杂交品种则随生长周期,萼片也逐渐变紫,但并非全为紫色,而是紫、绿相间。本实验针对萼片为何会出现该种变化进行了如下研究及结果分析：1.选择三种茄子生长成熟的果实萼片作为实验材料。分别为全绿的欧洲绿萼品种茄子,东北紫萼品种茄子,及其绿、紫相间的杂交品种。采用RACE及同源克隆的方法分别克隆了这三个品种茄子DFR及MYB 6个基因的cDNA,命名为SmDFR和SmMYB。2.DFR和MYB基因分析欧洲绿萼SmDFR基因cDNA全长1016bp,从82bp-716bp为开放阅读框,编码213个氨基酸,登录号为KX224250;东北紫萼SmDFR基因cDNA全长1128bp,从332bp-973bp为开放阅读框,共213个氨基酸,登录号为KX224251；杂交品种SmDFR基因cDNA全长1005bp,从73bp-708bp为开放阅读框,共211个氨基酸,登录号为KX224252。欧洲绿萼SmMYB基因cDNA全长969bp,从116bp-578bp为开放阅读框,共编码153个氨基酸,登录号为KX224253；东北紫萼SmMYB基因cDNA全长959bp,从178bp-621bp为开放阅读框,编码153个氨基酸,登录号为KX224254;杂交品种SmMYB基因cDNA全长993bp,从140bp-582bp为开放阅读框,编码153个氨基酸,登录号为KX224255。3.采集萼片,对三个品种现蕾期、盛蕾期、初花期,盛花期4个时期的花青素含量进行测定。检测结果表明,欧洲绿萼品种花青素含量无明显变化；而东北紫萼则随生长周期推进,花青素含量明显升高；杂交品种的花青素含量则处于上述二者之间,与观察到的萼片紫色变化程度成正相关,但又并非完全符合肉眼观察的颜色变化,其中可能与pH值等诸多因素有关。荧光定量PCR结果表明,DFR及MYB的表达水平变化与其花青素含量正相关。证实三个品种中萼片颜色及花青素含量变化与DFR及MYB的表达模式及表达量成正相关。但由于前期试验所得结果,所得氨基酸比对差异并不大,而表达量差异则有明显异,故推断可能与该基因的启动子有关,调控这些基因呈现出该种变化,而且所得的这两种基因均与光信号调控有关,亦有可能受光照影响而至。4.为了进一步验证SmMYB基因的作用,利用GATEWAY技术对三个品种种的SmMYB进行了拟南芥过表达转基因实验。