基于逆流色谱法的水黄皮增效活性成分研究

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本文围绕发现海洋发掘生理生态功能物质的目标,建立基于高速逆流色谱和等效线分析的新方案,从红树林植物中发掘增效活性成分。  对海洋潮间带的红树林植物水黄皮的增效功能(Synergy)物质开展了研究。设计了一种基于高速逆流色谱法(HSCCC)和等效线分析(Isobolographic analysis)的方案,将活性提取物看作两个独立样品的组合,分别是目标化合物和完全敲除目标化合物的混合物,即化学差减物(Chemical subtract)。用HSCCC快速制备这两个独立样品,用于等效线分析,可准确判断目标化合物的增效活性。应用新方案从有卤虫致死活性的水黄皮石油醚萃取物中快速制备了3个主要化合物(pinnatin(1),3,7-Dimethoxy-3,4-methylenedioxy flavone(2),karanjin(3))及其化学差减物,并检测其卤虫致死活性的增效功能。  根据分配系数值(K)选择含有正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(14∶7∶10∶10,v/v/v/v)的两相溶剂体系进行HSCCC一步分离)。通过HSCCC将提取物分离成七个级分(Fr1-7),总质量回收率为96.3%。Fr2,4和6的级分峰分别是对应于化合物3,2和1。色谱分析后目标化合物的纯度和回收率分别为96.1%-92.2%,95.9%-94.9%和97.5%-96.1%,通过重组除去含有目标化合物的馏分所有HSCCC级分,制备各目标化合物的化学差减物。  结果显示karanjin与其化学差减物之间存在明显的协同效应(效力比0.47),表明,该提取物的毒性是由协同作用产生的,而karanjin是参与这种协同作用的增效剂之一。另外两种化合物被排除在协同作用物质之外,因为这两种化合物对它们的化学差减物表现出了加和的效果。这是首次从水黄皮中发现增效化合物(Snyergist)。本研究为发现增效天然产物提供了一种新思路,可改进活性跟踪分离的效率,对于揭示水黄皮的化学防御机制以及深入开发利用具有参考价值。
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