利用cDNA微矩阵技术分析苯中毒患者肿瘤相关基因表达谱

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  目的:研究不同程度苯中毒工人外周血白细胞肿瘤相关基因差异表达改变的情况,探讨接触苯导致肿瘤发生的分子机制。   方法:选择被法定职业病诊断机构确诊的6名制鞋作业苯中毒工人和1名疑似苯中毒工人作为实验组,6名苯中毒工人分别为慢性轻度苯中毒2例、慢性中度苯中毒2例、慢性重度苯中毒1例、再生障碍性贫血1例;将未接触毒物的非苯作业工人作为对照。实验组和对照组在我们跟踪调查的3个月内均无服用药物史,且实验组与对照组按年龄(差别3岁以内)、性别(均为女性)、文化程度、吸烟史、饮酒史等一比一配对。   用白细胞分离液分离出外周血白细胞,Trizol法提取RNA,琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA的质量,纯化RNA,随后进行逆转录杂交探针标记,实验组样品采用反转录Cy3荧光标记cDNA(呈红色),对照组样品采用反转录Cy5荧光标记cDNA(呈绿色)。利用七张含有2780个cDNA克隆的微阵列肿瘤相关基因芯片进行杂交,杂交信号用扫描仪进行扫描,然后将图像转化为基于荧光强度的数字信号,运用聚类分析软件,对筛选出的具有特异性表达的肿瘤相关基因进行分析。   结论:7张基因芯片结果中癌基因GRO1、GRO2、TGFBR3、RAF-1、PIM2、BCL2、LYN、RAP1A、RALB、IFITM1、LENG4、MNDA、C20ORF3、SET表达上调,这些基因表达水平的改变是细胞癌变的早期事件,它们可能为细胞癌变的重要标志。抑癌基因FAU、DOC1、ING1、BRCA2、TP53、VHL的下调表达说明其功能失活、缺失及突变,此时细胞恶性转换,而产生肿瘤。这些基因表达异常的改变为苯的骨髓毒作用分子机理的探讨提供了重要的线索,提示其可能为致白血病的关键基因,在苯致白血病中起着重要的作用。癌基因FOSB、MCT-1、DJ-1、JUN、MAP3K8等的下调表达,我们考虑可能由于苯中毒导致患者机体内白细胞降低所致。   聚类分析方法根据基因表达谱,将样本和基因分别进行聚类,聚类在一起的基因在7个样本中具有类似的表达谱,考虑这些基因可能在病理、生理条件下受某些共同基因的调节,或这些基因在作用机制上存在某些共同点。   
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