论文部分内容阅读
帕金森氏病(Parkinsons Disease，PD)是一种中老年人常见的慢性进行性神经系统退行性疾病，其主要病理变化是黑质致密部多巴胺能神经元进行性死亡、残存神经元多巴胺合成能力降低，从而导致锥体外系运动调节功能减弱。目前关于帕金森氏病的发病机制研究涉及到遗传易感、环境毒素、老化、凋亡等很多方面，其中Ⅱ型囊泡单胺转运体(VMAT2)在储存传递单胺类神经递质、清除神经毒性物质入囊泡等方面的功能在帕金森氏病发病机制中起到了关键的作用。Appoptosin，又名SLC25A38，是一个与APP/AICD有相互作用的定位于线粒体内膜的转运蛋白，在caspase的依赖性细胞凋亡中发挥重要作用，通过影响heme的合成以增加细胞内氧自由基是其导致细胞凋亡的可能机制，在大脑缺血中风的鼠模型和Aβ/glutamate等神经毒性物质刺激时，appoptosin表达水平都显著升高。为进一步探讨appoptosin的病理生理作用，我们在本论文中对appoptosin的促凋亡及其在帕金森氏病中的作用进行了实验研究。 我们发现，在SH-SY5Y细胞和小鼠皮层原代神经元中过表达appoptosin时细胞死亡增多，而appoptosin敲除鼠杂交后得到的纯合敲除鼠不能存活，因体内缺乏heme表现为颜色发白。当用鱼藤酮处理SH-SYSY细胞和小鼠中脑原代神经元时，发现细胞内appoptosin的mRNA水平和蛋白水平均升高，这提示我们appoptosin可能是帕金森病的一个危险因素。通过微阵列芯片分析，我们发现了一个受appoptosin调控的基因，EphB4，在N2a细胞和小鼠皮层原代神经元中转入过表达和干扰appoptosin表达的质粒后，EphB4的mRNA水平和蛋白水平都是受appoptosin正向调控的，但是它在鱼藤酮的作用下并没有明显变化，提示appoptosin对EphB4的正向调控并不在帕金森病细胞模型中发挥作用。我们继续利用微阵列芯片技术筛选appoptosin影响的基因，得到了一个已知在帕金森病中有明确作用的基因，VMAT2，当我们在SH-SYSY细胞和小鼠中脑原代神经元中分别过表达和干扰appoptosin的表达时，VMAT2的mRNA水平和蛋白水平均出现了反向的变化，即appoptosin对帕金森病保护蛋白VMAT2有负向调控作用，在进一步的研究中，我们发现在帕金森病细胞模型中，appoptosin对VMAT2的下调作用更大，且凋亡标记物c-PARP表达更多，这提示我们appoptosin很有可能通过下调VMAT2从而对帕金森病造成危险。 综上所述，我们进一步补充了appoptosin在促进细胞凋亡方面的研究，并初步证明了appoptosin在帕金森病中的作用，对appoptosin的病理生理功能以及appoptosin在神经退行性疾病中的作用有了更深一步的了解。