农杆菌介导抗虫基因PPA的旱稻转化

• 作 者: 张冠华
• 机 构: 河北科技大学
• 出 处: 河北科技大学
• 发表日期: 2016年01期
• 关键词: 旱稻 农杆菌介导法 除草剂 PCR Southern杂交

由于水资源短缺,导致水稻的生产受到限制,旱稻作为一个需水量少耐干旱的品种,具有良好的发展及应用前景。由于虫害是导致水稻减产的一个重要因素,利用转基因培育具有抗虫性的旱稻品种,具有经济效益和生态效益。PPA基因具有杀虫的生理活性,在抗虫转基因作物育种方面应用前景广阔。本研究选用“旱稻2号”作为实验材料,以Bar基因作为筛选标记基因,通过农杆菌介导法将抗虫基因PPA导入旱稻的基因组中,对转化体系进行中的各种因素进行了优化,培育出了有抗除草剂、抗虫活性的转基因旱稻植株。通过PCR对转化旱稻植株进行了鉴定,PCR结果证明PPA基因已经成功整合到旱稻2号基因组中。大田喷洒0.5 mg/mL的草铵膦,筛选得到有除草剂抗性的T₁代植株。在实验室对T₂代转化株系进行纯合体筛选,对全部携带除草剂抗性的株系进行PCR鉴定,筛选纯合株系。本实验利用地高辛标记的Southern杂交技术对筛选得到的转PPA的旱稻2号株系进行检测。Southern杂交有许多影响因素,例如:酶切体系、样品DNA的量、探针浓度、杂交条件等。实验结果表明:在60μL的酶切体系中适宜加入15μg的DNA,90U的内切酶,酶切15-16 h。在杂交体系中5 mL杂交液中适宜加入的探针的量为150 ng。Southern杂交结果表明:PPA基因以多拷贝的形式整合到旱稻2号基因组中。